[发明专利]酸枣仁汤多糖提取物、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种酸枣仁汤多糖提取物、制备方法及在制备镇静、催眠药物中的应用，该工艺简单、成本低廉、适于工业化制备，可用于分离纯化酸枣仁汤多糖，为酸枣仁镇静催眠药物研发奠定基础。

技术领域

本发明属于中药制药领域，具体涉及一种酸枣仁汤多糖提取物制备方法及其在镇静、催眠药物中的应用，该工艺简单、成本低廉、适于工业化制备。

技术背景

目前多糖提取方法还比较落后，主要采用传统的水提醇沉法，由于多糖与色素结合紧密，并含有少量黏性物质，因此在提取分离过程中使成本增加，不易产业化。膜法作为一种新型的分离技术，不但具有能耗低、单级分离效果高、工艺简单，可在室温或低温下操作，而且用于中药分离、纯化时所得制品收率高、纯度好。

发明内容

发明提供了一种酸枣仁汤多糖提取物，该提取物中多糖分子量小于50kDa，具有良好的镇静、催眠活性。

本发明还提供了制备上述酸枣仁汤多糖提取物的方法，其步骤如下：

(1)称取酸枣仁汤各组成药味。

(2)用4-40倍量，体积浓度为50-95％乙醇回流提取，弃去乙醇液。

(3)残渣经干燥处理，加5-10倍量水浸提两次(30～70℃)，每次0.5-2h。

(4)提取液静置过夜后将上清液离心，上清液用截留分子量为50kDa的超滤膜进行超滤处理，得到酸枣仁汤多糖超滤液。

(5)向多糖超滤液中加入体积浓度为60-90％乙醇，冷藏过夜，离心，沉淀干燥或冻干后，即得。

本发明还首次将HPLC-ELSD方法应用于酸枣仁汤中多糖的含量测定。采用Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以甲醇-水(5:95)为流动相，ELSD检测；将酸枣仁汤多糖提取物溶于水，水解后作为供试品溶液，由线性方程求出样品液中葡萄糖的浓度，再按下式：多糖含量％＝f×(C×D)/W，[f为1.032，W为多糖提取物的重量(μg)，C为多糖中葡萄糖浓度(μg·mL-1)，D为稀释体积(mL)] 计算样品中多糖含量。

本发明以小鼠自主活动次数、阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠只数和阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间为药理指标，确定了酸枣仁汤中具有镇静催眠作用多糖分子量范围为小于50kDa。

具体实施方式

实施例1：精密称取酸枣仁汤各组成药味，即酸枣仁(54g)、茯苓(18g)、川芎(18g)、知母(18g)、甘草(9g)，置100ml圆底烧瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚(60～65℃)脱脂4h，残渣取出，干燥、研碎、过40目筛后，用25倍70％的乙醇回流提取3h除去皂苷、黄酮等杂质，残渣再经过干燥等处理，分别加10倍，8倍体积水浸提两次(60～65℃)，每次1h。提取液静置过夜后将上清液离心，上清液依次用50，10kDa的超滤膜进行超滤处理。超滤温度18～60℃，操作压力0.02～0.2MPa，pH1～13，料液浓度为原始提取液浓度，所得截留液分别收集，浓缩至一定浓度，得到不同分子量范围的酸枣仁汤多糖原液。抽滤，溶液经旋转蒸发器浓缩(60～65℃)后，加80％乙醇醇沉得到絮状沉淀，4℃冷藏过夜，3000r/min离心10min得到沉淀，室温下干燥后溶于水再经过三次醇沉，得到M<10kD、10kD<M<50kD、M>50kD三段不同分子量酸枣仁汤多糖黄褐色多糖样品，得率分别为4.8％，14.6％，35.6％。

实施例2：精密称取酸枣仁汤各组成药味，即酸枣仁(54g)、茯苓(18g)、川芎(18g)、知母(18g)、甘草(9g)，置100ml圆底烧瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚(60～65℃)脱脂4h，残渣取出，干燥、研碎、过40目筛后，用4倍50％的乙醇回流提取3h除去皂苷、黄酮等杂质， 残渣再经过干燥等处理，分别加10倍，5倍体积水浸提两次(60～65℃)，每次0.5h。提取液静置过夜后将上清液离心，上清液依次用50，10kDa的超滤膜进行超滤处理。超滤温度18～60℃，操作压力0.02～0.2MPa，pH：1～13，料液浓度为原始提取液浓度，所得截留液分别收集，浓缩至一定浓度，得到不同分子量范围的酸枣仁汤多糖原液。抽滤，溶液经旋转蒸发器浓缩后，加90％乙醇醇沉得到絮状沉淀，4℃冷藏过夜，12000r/min离心5min得到沉淀，室温下干燥后溶于水再经过三次醇沉，得到M<10kD、10kD<M<50kD、M>50kD三段不同分子量酸枣仁汤多糖黄褐色多糖样品，得率分别为4.0％，12.2％，30.1％。