[发明专利]一种抗平滑肌抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫检测领域，具体地，本发明提供了一种抗平滑肌抗体IgG的化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

抗平滑肌抗体（smooth muscle antibody，SMA）是自身免疫性肝炎的血清学标志抗体。在该疾病患者中SMA的阳性检出率可达90%。高滴度的SMA（大于1:1000）对诊断自身免疫性肝炎的特异性可达100%。在自身免疫肝炎患者，SMA主要为IgG型，而在原发性胆汁性肝硬化与自身免疫性肝炎重叠时，常以IgG和IgM型SMA同时出现。在肝外性胆汁堵塞，药物诱发性肝病、急性病毒性肝炎及肝癌患者中，SMA的阳性检出率极低，因此该抗体的检测有助于自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化的诊断及其他肝脏疾病的鉴别诊断。

SMA IgG亦见于其他一些疾病，如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、麻风、患皮肤黏膜淋巴结综合征的小儿、梅毒、干燥综合征、类风湿性关节炎等，肿瘤及病毒感染者也有不同程度的阳性检出率。

临床检测抗平滑肌抗体IgG的常见方法有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着一些不足之处。

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1) 在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2) 操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3) 荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4) 结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5) 只能进行定性检测，不能进行定量测定。

二、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法（ELISA）被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：

（1） 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

（2） 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；

（3） 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

（4） 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；

（5） 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；

（6） 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。

发明内容

目前抗平滑肌抗体IgG检测技术存在以下缺点：检测成本高、检测灵敏度低、重现性低、不能定量、操作复杂等。

本发明正是为了克服以上所述缺点，公开了一种检测成本低、灵敏度高、重现性高、可以定量、操作简单的抗平滑肌抗体IgG试剂盒及其制备方法。本发明首先制备化学发光免疫分析试剂盒，主要包括：平滑肌抗原包被的磁颗粒、鼠抗人IgG抗体包被的吖啶酯以及抗平滑肌抗体IgG定标品；然后利用全自动化学发光免疫分析仪对定标品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件，测试实际样本，根据样本发光值计算样本浓度；最后对抗平滑肌抗体IgG全自动化学发光免疫分析系统进行性能（灵敏度、精密度、干扰性）的评价。

本发明与目前技术相比，具有以下优点：

1、本发明选择吖啶酯作为标记材料，并应用于化学发光免疫分析系统，该发光体系为直接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，该反应不需要酶的参与，更加节约成本；