[发明专利]一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法

说明书

本发明公开一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)无菌播种：取处理后的猕猴桃种子，接种到初代培养基中，培养3—4周，直至种子萌发并生长形成实生苗；(2)增殖培养：切取步骤(1)所述实生苗的不带芽点的茎段或叶片，接种于不定芽诱导培养基中，培养4—6周，直至不定芽生成至一定长度；或者切取步骤(1)所述实生苗的带腋芽或顶芽的茎段，接种于丛生芽诱导培养基中，培养3—5周，直至丛生芽生成至一定长度；(3)壮苗生根培养：将步骤(2)所述不定芽或丛生芽接种至壮苗生根培养基中，培养3—4周，即得猕猴桃无菌种苗。其幼苗培养时间短，生根率高达95％以上，成活率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理。

技术领域

本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法。

背景技术

猕猴桃，也称奇异果，果形一般为椭圆状，早期外观呈绿褐色，成熟后呈红褐色，表皮覆盖浓密绒毛，其内是呈亮绿色的果肉和一排黑色或者红色的种子。因猕猴喜食，故名猕猴桃；亦有说法是因为果皮覆毛，貌似猕猴而得名，是一种品质鲜嫩，营养丰富，风味鲜美的水果。猕猴桃含有猕猴桃碱、蛋白水解酶、单宁果胶和糖类等有机物，以及钙、钾、硒、锌、锗等微量元素和人体所需17种氨基酸外，还含有丰富的维生素C、葡萄酸、果糖、柠檬酸、苹果酸、脂肪，具有很高的推广栽培价值。

现有的猕猴桃砧木栽培一般采用由种子萌发培养的猕猴桃实生苗，猕猴桃种子具有休眠特性，萌发慢，对发芽环境条件要求高，因此生产上使用层积法、变温处理、激素处理等方法来促进其萌发。虽然这些方法能提高其发芽率，缩短了萌芽时间，但仍不能满足快速培育健壮猕猴桃实生苗的大量需求。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法，其幼苗培养时间短，增殖速率快，生根率高达95％以上，成活率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理；本方法可实现猕猴桃无菌种苗的快速繁殖。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法，所述快速繁殖方法包括以下步骤：

(1)无菌播种：取处理后的猕猴桃种子，接种到初代培养基中，培养3—4周，直至种子萌发并生长形成实生苗；

(2)增殖培养：切取步骤(1)所述实生苗的不带芽点的茎段或叶片，接种于不定芽诱导培养基中，培养4—6周，直至不定芽生成至一定长度；

或者切取步骤(1)所述实生苗的带腋芽或顶芽的茎段，接种于丛生芽诱导培养基中，培养3—5周，直至丛生芽生成至一定长度；

(3)壮苗生根培养：将步骤(2)所述不定芽或丛生芽接种至壮苗生根培养基中，培养3—4周，即得猕猴桃无菌种苗。

优选的，步骤(1)所述初代培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.1—1.0mg/LGA3、1.0mg/LPVP、25g/L蔗糖、6g/L琼脂。

更为优选的，步骤(1)所述初代培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.5mg/LGA3、1.0mg/LPVP、25g/L蔗糖、6g/L琼脂。

优选的，步骤(1)所述猕猴桃种子的处理方法为：在无菌操作台上，将猕猴桃种子先用75％酒精处理20—40s，用无菌水清洗3—4次，再用0.1％的升汞处理10—13min，用无菌水清洗5—7次，晾干即可。

更为优选的，所述猕猴桃种子取自日本红心猕猴桃果实，在取猕猴桃种子之前，先将日本红心猕猴桃果实在1—5℃下冷藏3—7天。通过低温冷藏使种子破除休眠，便于种子的萌发。

优选的，步骤(2)所述不定芽诱导培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.01—0.5mg/L TDZ、30g/L蔗糖、6g/L琼脂。

更为优选的，步骤(2)所述不定芽诱导培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.05mg/L TDZ、30g/L蔗糖、6g/L琼脂。