[发明专利]凝结芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂和饲料

说明书

本发明公开了一株拮抗链球菌的凝结芽孢杆菌及其应用，该菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.12196。将该菌株制成菌粉，可添加到动物饲料中，也可作为拮抗链球菌的微生物制剂应用，用含有该菌株的饲料饲喂罗非鱼可有效防治链球菌病。将该菌和枯草芽孢杆菌、约氏乳杆菌进行混合，制成复合微生态制剂，可以提高罗非鱼的生长性能、提高肝脏超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和血清中溶菌酶的活力。另外，该菌发酵液还可以用作养殖环境改良剂，将上述菌的发酵液泼洒到罗非鱼养殖池塘，可降低养殖水体中链球菌的数量，还可以在低氧条件下清除水体中的亚硝酸盐。

技术领域

本发明属于饲料微生态领域，具体涉及一株凝结芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂和饲料。

背景技术

中国是世界上最大的罗非鱼生产国，产量、出口量和出口额均居世界首位，罗非鱼为国内最具国际竞争力的淡水养殖品种，也是最具产业化发展条件的品种，已成为中国南方地区的支柱性产业，在国内有着较强的发展优势。然而，由无乳链球菌、海豚链球菌引起的罗非鱼病害，在夏、秋季易爆发，该病传染性强，幼鱼与成鱼的发病率达10％～30％，死亡率可达25％～80％，甚至更高，给罗非鱼养殖业造成了极大的经济损失，而且还有不断加剧的趋势。

目前在罗非鱼养殖生产上，人们主要是通过使用抗生素类的化学药物对链球菌引起的病害进行防治，但大量、长期地使用广谱抗生素、化学药物和水体消毒剂，对生态环境及公众健康造成的负面影响受到了人们的关注。近年来，水产疫苗虽然取得了一定的进展，但受疫苗免疫途径、水体环境、病原变异、鱼类自身特点等因素的制约，其在生产上的推广使用尚需时日。因此，迫切需要寻找一种安全、高效的手段来防治罗非鱼链球菌病害。

益生菌制剂可以调节肠道微生物区系的平衡、促进肠道的生长发育、增强机体的免疫力进而促进机体生长。且由于其无抗药性、无残留、无污染等特性，成为抗生素的良好替代品之一。凝结芽孢杆菌作为益生菌的一种，既具有乳酸菌产酸的特性，又具有芽孢杆菌耐高温、抗逆性强和耐储存的优点。欧盟已通过了凝结芽孢杆菌的安全认定，批准其在饲料中应用。《中华人民共和国农业部公告第2045号》批准凝结芽孢杆菌作为饲料添加剂使用。

亚硝酸盐中毒一直是养殖过程中碰到的另一个比较棘手的问题，往往给养殖户带来比较惨重的损失。亚硝酸盐的生物降解大都需要氧的参与，而目前的高密度养殖导致池塘中氧气并不充裕，我们需要开发出在低氧条件下就能降解亚硝酸盐的新产品。

目前，国内尚未有将凝结芽孢杆菌作为链球菌拮抗剂的产品，该菌在罗非鱼饲料中的应用也未见报道。将该菌做成拮抗链球菌的产品，同时在低氧条件下降解亚硝酸盐，对实现罗非鱼健康养殖意义重大。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种凝结芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂和应用。

首先，本发明提供一株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)新菌株。

该菌株分离自土壤，在MRS平板上呈白色菌落，直径1～2mm，中级隆起，表面稍干燥，边缘不整齐，正反面颜色一致，不透明，菌体杆状，单独存在，芽孢椭圆。测定该菌株的16S rDNA，与 GenBank公布的凝结芽孢杆菌HM-08的同源性最高(99％)，结合生理生化试验结果，该菌被鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)，于2016年3月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.12196。

本发明还提供凝结芽孢杆菌CGMCC No.12196的发酵方法，包括如下的步骤：

1、平板培养复壮：将凝结芽孢杆菌菌种接种于MRS平板培养基上，于42℃培养12-24h，使菌复壮，并形成单菌落；