[发明专利]一种检测水中微囊藻毒素的微流控芯片及检测方法

权利要求书

1.一种用于制备微囊藻毒素检测的微流控芯片的方法，其特征在于，包括有机玻璃制成的基片和盖片，所述盖片热键合于所述基片上，所述基片上刻有微流路，所述微流路依次包括试剂通道、圆形检测池(8)和废液排出通道(9)，所述试剂通道包括免疫磁珠通道(1)、PBST缓冲溶液通道(2)、微囊藻毒素抗体通道(3)、荧光素标记二抗通道(4)、空白样品通道(5)、水样通道(6)和抗原抗体解离剂通道(7)，所述检测池(8)内通过微型电路及磁铁固定有免疫磁珠，所述免疫磁珠表面偶联有微囊藻毒素，所述微囊藻毒素通过包被原MC-LR-OVA偶联于磁珠表面，所述磁珠与所述包被原的偶联包括如下步骤：将20μL的摩尔浓度3.0mMNHS和20μL的摩尔浓度为3.0mM EDC加入至2.0mL的质量体积浓度为0.5mg/mL的纳米级Fe₃O₄微粒的水溶液中反应1h，然后离心分离并用PBS洗3次，将12.0μl质量体积浓度为1.0mg/mL的MC-LR-OVA加入上述所得溶液中反应过夜；然后加入20μL的摩尔浓度为3.0mM乙醇胺水溶液中反应2h，最后用PBS缓冲溶液洗2次，并用PBS配置成2ml的MC-LR-OVA-磁珠溶液。

2.如权利要求1所述的用于制备微囊藻毒素检测的微流控芯片的方法，其特征在于，所述微流路刻制包括如下步骤：(1)基片依次用浓硫酸、异丙醇与丙酮混合溶液及乙醇处理后去离子水冲洗，氮气枪吹干，烘箱中去除剩余水分；

(2)在玻璃基片表面镀一层Cr，用甩胶机均匀的覆盖一层光胶；将RZJ一340正性光刻胶旋转涂覆在经过处理的基片上，热板上前烘，以蒸发掉光刻胶中残留的溶剂；

(3)对基片进行紫外曝光、显影、腐蚀；腐蚀前，将玻璃片浸入铬的刻蚀液中进行刻蚀并坚膜，腐蚀在室温下进行，腐蚀液为含HF和HNO₃的刻蚀液，采用了多次坚膜腐蚀；

(4)刻蚀达到要求的深度后，用发烟硝酸去除光刻胶。

3.如权利要求1所述的用于制备微囊藻毒素检测的微流控芯片的方法，其特征在于，所述基片和所述盖片键合包括如下步骤：依此用水、丙酮、超纯水、硫酸、超纯水将盖片和刻蚀后的基片用超声波清洗器彻底洗净后,在超纯水环境中将盖片和基片直接贴合，取出放进真空干燥箱干燥进行预键合，将预键合后的基片和盖片平放在高温炉中，完成键合。