[发明专利]利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法

权利要求书

1.利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法，其特征在于，从公共数据库或通过测序技术获取在昆虫触角中表达的嗅觉基因信息，利用特异性挥发物处理昆虫24-48h，然后检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量，与对照未经过特异性挥发物处理的昆虫相比，将表达量增加的嗅觉基因，其所编码的蛋白作为候选的昆虫相关嗅觉蛋白；

所述昆虫为华北大黑鳃金龟；

所述特异性挥发物为芳樟醇或反-2-己烯醇；其中，芳樟醇对应的相关嗅觉蛋白为OBP7、8、9、11、13、15、27、28，反-2-己烯醇对应的相关嗅觉蛋白为OBP4、9、13。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取昆虫触角RNA，转录组测序获得大量在昆虫触角中表达的嗅觉基因；

2)将昆虫成虫置于设有透气孔的养虫箱中，饥饿处理24-48h；然后将可持续释放特异性挥发物的容器放入养虫箱中，24-48h后取昆虫触角，提取RNA；同时设立对照组，即饥饿处理后的昆虫进行正常饲喂，24-48h后取昆虫触角，提取RNA；

3)检测昆虫触角中不同嗅觉基因表达量的变化。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述昆虫成虫为羽化后2日龄成虫。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述养虫箱的材质包括有机玻璃，养虫箱的顶端设有一个直径为1cm小孔作为透气孔，箱体为正方体或长方体。

5.根据权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)将5个可持续释放特异性挥发物的容器分别置于养虫箱的四个角落和中间；其中，所述可持续释放特异性挥发物的容器为盛有特异性挥发物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上设有若干透气孔。

6.根据权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)是将RNA反转录成cDNA，并利用荧光定量PCR检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR所用引物序列如SEQ ID NO:1-52所示。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR的反应体系为：

反应程序为：95℃60s；95℃5s，60℃15s，40个循环。