[发明专利]一种利用实验室人工饲养蜜蜂幼虫评价农药对蜜蜂幼虫毒性的方法

权利要求书

1.一种利用实验室人工饲养蜜蜂幼虫评价农药对蜜蜂幼虫毒性的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)蜜蜂幼虫的准备：向含有蜂群的蜂箱内插入空蜂脾，将产卵期内的蜂王固定在所述空蜂脾上进行产卵，20～28小时后将蜂王放出至含有蜂卵的蜂脾外，该含有蜂卵的蜂脾继续留在蜂箱内，直到其中的蜂卵孵化成蜜蜂幼虫；

(2)蜜蜂幼虫的实验室饲养：从蜂箱内取出所插入的蜂脾，挑取所述蜜蜂幼虫用基础口粮进行适应性饲养3天，于第4天进行健康检查，选取健康幼虫；

(3)受试农药的添加：将步骤(2)选取的健康幼虫分成对照组幼虫和处理组幼虫并继续饲养3天，其中处理组幼虫用受试饲料饲养，所述受试饲料含有各浓度的受试农药和基础日粮；

(4)化蛹及观察：将步骤(3)中饲养3天后的即将进入蛹化期的幼虫转移至化蛹板的板孔中准备化蛹，观察幼虫在板孔中完成排便、吐丝、化蛹和羽化的过程，统计各幼虫的存活、化蛹或/和羽化情况。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述蜂群为四周内未用药的、健康的、已知来源和生理状态的蜂群；步骤(2)中，所挑取的蜜蜂幼虫为1日龄后期幼虫，其体色为白色。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，产卵期内的蜂王在所述空蜂脾上进行产卵的时间为24小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述基础日粮的质量组成为：新鲜蜂王浆50±5％，无菌水37±2％，葡萄糖6±1％，果糖6±1％，酵母提取物1±0.5％。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述基础日粮的质量组成为：新鲜蜂王浆50％，无菌水37％，葡萄糖6％，果糖6％，酵母提取物1％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述适应性饲养采用装有基础日粮的孔板进行；孔板中每孔分配一只蜜蜂幼虫，每孔蜜蜂幼虫基础日粮的饲料量为40～60μL，孔板中的基础日粮每24小时更换。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于步骤(2)中的适应性饲养和步骤(3)中的饲养的环境条件均为：温度34±2℃，湿度95±1％。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于步骤(2)中的适应性饲养和步骤(3)中的饲养的环境条件均为：温度34±1℃，湿度95％。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于步骤(2)中的适应性饲养和步骤(3)中的饲养的环境条件均为：饲养时孔板置于箱底部装有甘油水混合液的密闭箱中，再放于34±1℃培养箱内培养。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述对照组幼虫分为空白对照组幼虫或/和溶剂对照组幼虫；所述空白对照组幼虫用基础日粮饲养，所述溶剂对照组幼虫用添加了溶剂的基础日粮作为饲料饲养，其中每41～61μL饲料中含有溶剂0.5～5μL；所述处理组幼虫分为多个处理组，每个处理组分别用含有不同浓度受试农药的受试饲料饲养。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述处理组幼虫分为至少5个处理组。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中，受试饲料的制备方法为：受试农药用蒸馏水或/和对蜜蜂幼虫无毒性的有机溶剂溶解后，配制成一个或多个不同浓度的受试农药溶液，将其分别加入基础日粮中配制得到受试饲料，其中每41～61μL受试饲料中含有受试农药溶液0.5～5μL。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于步骤(3)中，步骤(3)中继续饲养过程中每只蜜蜂幼虫的饲料量为41～61μL，饲料每24小时更换。