[发明专利]云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP‑OA2及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2，其特征在于，所述抗氧化多肽AOP-OA1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)原料预处理：取云南臭蛙皮肤分泌物，溶解于质量浓度为0.9％的生理盐水，真空冷冻干燥，-80℃保存备用；

2)Sephadex G50分子筛：将步骤1)中制备得到的云南臭蛙皮肤分泌物冻干粉溶解于去离子水中，上Sephadex G50柱子，用Tris-HCl缓冲液进行洗脱，流速为2.0毫升/10分钟，每10分钟收集一管，测定其在280nm下的吸光度，收集合并具有抗氧化活性的洗脱峰；

3)高效液相色谱反相层析：将步骤2)中制备得到的洗脱液上样于Hypersil ODS2柱子，实验仪器为Waters 1525高压液相系统，在流速为1毫升/分钟的条件下，用乙腈在线性梯度条件下进行洗脱，监测波长为215纳米，收集合并具有抗氧化活性的洗脱峰，浓缩干燥后得到目标物。

3.根据权利要求2所述的云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2的制备方法，其特征在于，步骤2)中的Sephadex G50柱子预先用20mM、pH6.8、含0.1M NaCl的Tris-HCl缓冲液平衡24小时。

4.根据权利要求2所述的云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2的制备方法，其特征在于，步骤3)中的Hypersil ODS2色谱柱需预先用含体积浓度为0.1％三氟乙酸的超纯水平衡。

5.根据权利要求2所述的云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2的制备方法，其特征在于，步骤3)中的乙腈为含0.1％三氟乙酸的乙腈。

6.根据权利要求2所述的云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2的制备方法，其特征在于，步骤3)中的线性梯度洗脱具体为：乙腈浓度从0％升至60％所消耗的时间为60min。

7.一种如权利要求1所述的云南臭蛙皮肤抗氧化多肽AOP-OA2在制备与抗氧化相关药物、保健品、化妆品中的应用。