[发明专利]包埋型纳米铁/复合微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.包埋型纳米铁/复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）菌体的制备：

分别挑取土壤杆菌（Agrobacterium sp.）、阴沟肠杆菌（Enterobactercloacae.）、杆状菌（Bacillus sp.）、戈登氏菌（Gordonia sp.）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida.）、施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri.）2环分别转移到营养液中，细菌在35-37℃的条件下培养1-3天，以5-18%的体积比例接种至含增殖培养基的容器中，在35-37℃的条件下培养1-3天，离心处理，获得上述菌体的对数生长期细胞；用磷酸盐缓冲液洗涤1-2次后；按体积百分比计，分别取5～8%土壤杆菌，4～6%杆状菌，7～15% 阴沟肠杆菌，10～19% 戈登氏菌，13～27% 恶臭假单胞菌和35～45%施氏假单胞菌混合，获得用于三氯生降解的菌体A；

（2）纳米铁溶液的制备：

采用液相还原法，在氮气保护的液相体系中，强还原剂KBH₄还原FeSO₄·7H₂O得到Fe⁰，用Fe⁰制备浓度为0.1~0.6g/L的纳米铁溶液，记为溶液B；

（3）包埋剂琼脂、PVA、SiO₂溶液的制备：

将琼脂、PVA在90-100℃的温度下加热完全溶解于清水，得到琼脂质量百分含量为5~9%，PVA质量百分数为7.5~15%的溶液，再加入SiO₂，控制SiO₂在混合物中质量浓度为1~3mg/L，待混合交替冷却至50℃，记为溶液C；

（4）交联剂硫酸铝饱和硼酸溶液的制备：

将硫酸铝粉末溶于饱和硼酸溶液中，得到摩尔浓度为0.1~1mol/L的硫酸铝的饱和硼酸溶液，记为溶液D；

（5）纳米铁/复合微生物菌剂制备：

在50-70℃恒温水浴条件下，按体积比分别取15~18%溶液B，6~15%的菌体A加入到57~66%溶液C中，搅拌混合均匀，在氮气保护的环境下滴加至室温的1-22%溶液D中，交联处理，清洗，保存，得到纳米铁/复合微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述营养液主要成分为牛肉膏6.0g/L，NaCl5.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，大豆粉2.0 g/L，pH 6.5，其余为水。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述增殖培养基主要成分为酪蛋白20.0 g/L，磷酸氢钾3.0 g/L，葡萄糖3.0 g/L，大豆粉4.0 g/L，氯化钠5.0 g/L，其余为水。

4.据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，按体积百分比计，所述磷酸盐缓冲液的成分为氯化钠9.0 g/L，氯化钾0.3 g/L，磷酸氢二钾1.2 g/L和磷酸二氢钾0.3 g/L，其余为水。

5.据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的保存是指在无菌生理盐水中浸泡并放置冰箱中4℃下保存。

6.据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述土壤杆菌（Agrobacterium sp.）、阴沟肠杆菌（Enterobactercloacae.）、杆状菌（Bacillus sp.）、戈登氏菌（Gordonia sp.）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida.）、施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri.）2环分别转移到30-40mL营养液中。