[发明专利]一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包含化学发光免疫反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其特征在于：

所述化学发光免疫反应板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，每孔内底部联合包被3ABC和2C融合蛋白；

所述3ABC和2C融合蛋白的联合包被过程为：将3ABC和2C融合蛋白加入到pH=9.6的碳酸盐缓冲液中，使3ABC和2C融合蛋白的浓度均为250ng/mL，30-37℃水浴15min；再加入柠檬酸铵，溶解，形成包被液，其中，包被液中柠檬酸铵的质量体积分数为20%；以100µL/孔的加样量将包被液加入到化学发光免疫反应板中，37℃孵育1h，再于4℃处理20-24h，甩掉化学发光免疫反应板中的包被液；再向每孔中加入200µL血清稀释液进行封闭，4℃静置20-24h；用PBST洗涤液洗涤2-3次，于37-50℃干燥1-2h，装袋封口，2-8℃保存；

所述3ABC融合蛋白为重组蛋白，其中的3C蛋白上第46位组氨酸突变为酪氨酸和第163位半胱氨酸突变为甘氨酸；

所述3ABC和2C融合蛋白制备中，3ABC融合蛋白所用的表达载体为pPROEX-HTb载体，2C融合蛋白所用的表达载体为SUMO载体；

所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗猪lgG抗体；

所述血清稀释液为pH=7.2~7.4且浓度为10mmol/L的磷酸盐缓冲液，其中包含体积分数为 0.01% 的Tween-20、质量体积百分数为1%的牛血清白蛋白和体积分数为1%的大肠杆菌裂解液；

所述化学发光底物包含0.1mmol/L 的鲁米诺和质量体积分数为0.1%的牛血清白蛋白，溶剂为0.05mol/L、pH=8.8的Tris缓冲液；

所述化学发光增强剂含有0.07mmol/L的IPP、3mmol/L的H₂O₂和体积分数为0.002%的Tween-20，余量为水。

2.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述酶标抗体的制备是在交联剂过碘酸钠作用下，将辣根过氧化物酶连接在抗体上，再加入硼氢化钠进行还原稳定。

3.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述大肠杆菌裂解液是将未经转化的大肠杆菌Rosetta（DE3）培养至对数期，离心，得菌体沉淀；向菌体沉淀中加入与其等体积的50mmol/L的PBS缓冲液，混匀，得混合物Ⅰ；将混合物置于-80℃冰冻，再室温融解，反复冻融三次；将经反复冻融的混合物Ⅰ置于400W条件下超声破碎5s，重复5次，每次间隔5s，得混合物Ⅱ；将混合物Ⅱ进行离心，取上清，即为大肠杆菌裂解液。