[发明专利]用于检测人类OPRM1基因A118G位点多态性的核酸、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于检测人类OPRM1基因A118G位点多态性的核酸及试剂盒，同时建立具有特异性强、灵敏度高、准确度高、操作简单的检测人类OPRM1基因A118G位点多态性的检测方法，为阿片类药物，如吗啡、芬太尼、曲马多、氨酚羟考酮、度冷丁等个体化剂量给药提供指导方案。本发明提供的检测方法采用完全闭管操作，操作简单、方便快捷、通过直接探测PCR过程中荧光信号值的获得检测的结果，不需要PCR后处理或电泳检测，克服了常规PCR技术的易污染、出现假阳性，能有效避免非特异性扩增难题，并且适合大批量样本的检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测人类OPRM1基因A118G位点多态性的核酸、试剂盒及方法。

背景技术

癌痛是由癌症所致的疼痛，与肿瘤细胞侵袭机体组织所造成，真实的或可能存在的组织损伤有关，是癌症患者常见的一种并发症，严重影响晚期癌症患者的生活质量和治疗效果。据世界卫生组织(WHO)统计，确诊的肿瘤患者中至少有1/3存在着不同程度的疼痛，晚期患者更是高达60％～90％。因此，癌痛控制与癌症的早期预防、早期诊断、早期治疗被列为WHO的4项重点规划。

尽管癌痛的药物治疗及非药物治疗方法多种多样，但是，在所有止痛治疗方法中，阿片类镇痛药是癌痛治疗必不可少的药物。而药物反应的个体差异，是临床用药中的常见现象，不同个体间药物稳定剂量的差异，可达40倍以上。在临床工作中发现不同患者，有效镇痛剂量差异很大，有研究人员发现10％～30％癌症患者经阿片类药物治疗后，仍不能有效缓解癌痛。根据相关研究，除了疾病的严重程度、药物之间的相互作用，营养状况等影响个体的用药反应外，阿片类药物如吗啡、羟考酮、.美沙酮、芬太尼作用时可能受药物代谢酶、转运蛋白、受体和药物作用靶点的基因多态性影响。因此，镇痛疗效相关基因的多态性及其对癌痛治疗的影响逐渐受到关注。

人类OPRM1基因定位于染色体6q24～25，是阿片类药物遗传差异的主要候选基因。μ阿片受体是内源性和外源性阿片物质镇痛的主要靶点，OPRM1基因编码μ阿片受体，目前，已经发现人类OPRM1基因存在100多个基因多态性位点和4个连锁不平衡(LD)区。研究证实，与镇痛相关的多态性位点有A6V、N40D、R260H、R265H和S268P，其中N40D(A118G)是最常见的多态性。A118G多态性在不同民族之间突变频率有一定的差异，非洲人N40D的突变率为4.7％，欧洲人N40D的突变率15.4％，日本人该基因的发生频率为48.5％，西班牙人则为14％，而在中国人等位基因G的发生频率约为30％。

A118G(N40D)突变是位于第118位的核苷酸由腺苷酸被鸟苷酸所取代，这个替换导致了μ-阿片受体细胞外N-末端第40位氨基酸由天冬氨酸取代天冬酰胺，使μ-阿片受体丢失了一个糖基化位点。在体内外实验中都已证实A118G(N40D)多态性能够影响阿片类药物的疗效，当118G为纯合子时，β-内啡肽与受体的结合是118A纯合子的3倍，通过药物动力学和药效动力学，对吗啡代谢后的活化形式吗啡-6-萄糖醛酸(morphine-6-glucuronide，M6G)进行的研究发现，118G纯合子会降低M6G的止痛作用，从而影响吗啡的镇痛疗效。

临床研究发现，吗啡对不同OPRM1基因型携带者都有一定的镇痛效应。但镇痛效应的强弱，三种基因型却显示出不同：突变型(GG型)的受试者前后痛阈差明显低于野生型(AA型)和杂合型(AG型)，提示等剂量吗啡对发生OPRM1基因型A118G的突变型(GG型)基因女性携带者的镇痛效应，明显弱于野生型(AA型)和杂合型(AG型)。也可以说，基因型为AA对吗啡镇痛用药更为敏感，GG型的患者吗啡的需求量大于AA型的患者。因此，检测OPRM1基因多态性可作为阿片类药物(如吗啡、芬太尼、曲马多、氨酚羟考酮、度冷丁)个体化剂量给药的预测指标。