[发明专利]一种以凋亡信号调节激酶1N端二聚化为靶点筛选用于治疗脂肪性肝炎药物的方法

权利要求书

1.一种凋亡信号调节激酶1的用途，其特征在于，以凋亡信号调节激酶1 N端二聚化为靶点筛选预防、缓解和/或治疗脂肪性肝炎的药物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物能够抑制凋亡信号调节激酶1 N端二聚化。

3.一种以凋亡信号调节激酶1 N端二聚化为靶点筛选预防、缓解和/或治疗脂肪性肝炎的药物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

（a）将含有凋亡信号调节激酶1 N端的体系和候选物质进行接触；所述的含有凋亡信号调节激酶1 N端的体系是含有凋亡信号调节激酶1 N端的细胞，或是含有凋亡信号调节激酶1 N端的溶液；

（b）观察候选物质对于凋亡信号调节激酶1 N端二聚化的影响；

其中，若所述候选物质可抑制凋亡信号调节激酶1 N端二聚化，则表明该候选物质是预防、缓解和/或治疗脂肪性肝炎的潜在物质。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

步骤（a）包括：在测试组中，将候选物质加入到含有凋亡信号调节激酶1 N端的体系中；和/或

步骤（b）包括：检测测试组的体系中凋亡信号调节激酶1 N端的二聚化作用，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的含有凋亡信号调节激酶1 N端的体系；

其中，如果测试组中检测结果显示凋亡信号调节激酶1 N端二聚化受抑制，就表明该候选物质是预防、缓解和/或治疗脂肪性肝炎的潜在物质。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

步骤（a）包括：

（1）选用CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统，分别将编码凋亡信号调节激酶1N端1-678号氨基酸的DNA连接至编码DNA结合结构域的pBIND载体以及转录激活结构域的pACT载体中，并将两种载体转染至动物细胞中，构建凋亡信号调节激酶1 N端二聚化哺乳动物双杂交筛选系统；若凋亡信号调节激酶1的N端正常二聚化，则当上述细胞继续转染入pG5luc载体后，萤火虫荧光素酶报告基因高水平表达；若凋亡信号调节激酶1的N端二聚化被抑制，则pG5luc载体上的萤火虫荧光素酶报告基因不表达；通过Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统可分析凋亡信号调节激酶1的N端二聚化情况；

其中，编码凋亡信号调节激酶1N端1-678号氨基酸的氨基酸序列如SEQ NO：1所示，核苷酸序列如SEQ NO：2所示；

（2）将候选短肽的核苷酸片段分别连接至psi-Flag载体中，将候选短肽质粒psi-flag-Peptides与pG5luc质粒同时转染上述已构建的用于凋亡信号调节激酶1 N端二聚化筛选的动物细胞；

步骤（b）包括：转染成功的细胞在培养24小时后检测萤火虫荧光素酶以及Renilla荧光素酶的RLU，并计算二者比值，根据得到的比值来比较不同样品间短肽抑制作用的程度。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（a）所用动物细胞选自HEK-293T、L02、Hela、 Huh7、 Hepg2、A549、3T3、MEFs、H9C2。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（a）所用动物细胞选自HEK-293T。