[发明专利]一种提高氨基葡萄糖发酵单位产量的组合物及其应用

权利要求书

1.一种提高氨基葡萄糖发酵单位的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将发酵菌种的种子液加入发酵培养基中；发酵罐初始溶氧为100％，发酵过程中控制溶氧为30％以上，全程流加氨水调节pH值； 所述的发酵菌种为重组大肠杆菌E.coli-glms-gna1，其通过以下方法制得：将来自大肠杆菌的氨基葡萄糖合成基因glmS基因和来自酵母菌的氨基葡萄糖乙酰化基因gna1基因插入质粒pET28(a)中，构建重组质粒pET28(a)-glms-gna1，转化大肠杆菌，获得重组大肠杆菌E.coli-glms-gna1；

所述glmS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述gna1基因的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；

(2)当发酵培养基中葡萄糖消耗完后，溶氧快速回升80％以上时，开始流加葡萄糖，调整搅拌转速及通气量，使溶氧恢复至30-40％；

(3)当发酵液OD_600nm值达到35-45时，一次性加入诱导剂IPTG及半胱氨酸和谷胱甘肽的组合物，继续培养；

(4)当谷氨酸含量高于50 mg/dL或氨基葡萄糖增长速率低于1 g/L∙h时停止发酵；

其中，步骤（3）中的半胱氨酸和谷胱甘肽的组合物为半胱氨酸和谷胱甘肽的混合水溶液，半胱氨酸和谷胱甘肽的质量比为3-6:1。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤（3）中的半胱氨酸和谷胱甘肽的组合物为半胱氨酸和谷胱甘肽的混合水溶液，半胱氨酸和谷胱甘肽的质量比为5：1。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中当发酵液OD_600nm值达到35-45时，一次性加入诱导剂IPTG及半胱氨酸和谷胱甘肽的组合物，继续培养；

其中，将半胱氨酸和谷胱甘肽的组合物加入发酵体系时，使半胱氨酸和谷胱甘肽在发酵体系中的浓度分别为4-7mg/L和0.6-1.5mg/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵过程中，控制温度为35-38℃，压力为0.05±0.01Mpa，发酵全程流加氨水调节pH值不低于6.9。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)流加葡萄糖的方法为每升发酵液每小时补加3-6g葡萄糖，按葡萄糖固体质量计算。

6.如权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述发酵培养基其1L配方为：葡萄糖6g/L，柠檬酸5g/L，磷酸二氢钾10g/L，硫酸镁2.7g/L，氯化钙0.1g/L，以水配制。

7.权利要求1-6任一所述的方法在制备治疗风湿性关节炎原料药物中的应用，所述风湿性关节炎原料药物为氨基葡萄糖。