[发明专利]一种决明子药材中9种真菌毒素的检测方法

权利要求书

1.一种决明子药材中9种真菌毒素的检测方法，采用液相色谱-三重四极杆线性离子阱串联质谱法，所述9种真菌霉素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、伏马毒素B1、伏马毒素B2、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

步骤1：标准品储备液的制备，将9种真菌毒素对照品用乙腈作为溶剂分别配制成标准储备液；

步骤2：混合标准品储备液的制备：取步骤1所得各标准储备液，用乙腈作为溶剂配制成混合在一起的混合标准品储备液；

步骤3：标准工作溶液的制备，将混合标准储备液用乙腈作为溶剂稀释成不同浓度的标准工作溶液；

步骤4：供试品溶液的制备，将决明子用溶剂提取，提取液过免疫亲和柱，用甲醇洗脱，取洗脱液配制成供试品溶液；

步骤5：基质匹配标准溶液的制备，将不含9种真菌毒素的决明子按步骤4供试品溶液制备方法制备不含9种真菌毒素的空白基质溶液，并将该溶液照步骤3的标准工作溶液的制备配制成基质匹配标准溶液；

步骤6：测定：在获得9种真菌毒素的标准曲线以及基质匹配溶液标准曲线后，将供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，按外标法根据基质匹配标准曲线确定和计算供试品溶液中9种真菌毒素的种类和含量。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤1标准品储备液的制备，方法为：分别取各固体真菌毒素标准品适量，加乙腈分别制成质量浓度为180-240μg/mL的标准品储备液，储存于-20℃冰箱中；

优选地，所述步骤1标准品储备液的制备，方法为：分别取各固体真菌毒素标准品适量，加乙腈分别制成质量浓度为200μg/mL的标准品储备液，储存于-20℃冰箱中。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤2混合标准品储备液的制备，方法为：精密量取各标准品储备液适量，加乙腈稀释，制得混合储备液，混合储备液中各成分的浓度为：黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2质量浓度分别为1μg/mL；伏马毒素B1、伏马毒素B2、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇质量浓度分别为10μg/mL，于-20℃冰箱中保存。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤3标准工作溶液的制备，方法为：准确吸取混合储备液系列体积，乙腈定容至2mL，制成系列质量浓度的标准工作溶液。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，其中，所述步骤4供试品溶液的制备，方法为：取决明子粉末1.0g，精密称定，加PBS溶液3-7mL浸泡20-40min，加含3-7％甲酸的乙腈溶液2.0-3.0mL，涡旋1.5-3min，加无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸三钠和柠檬酸氢二钠合计2.75-4.25g，涡旋1min，以10000r/min的速度离心2-4min，取上清1.5mL用含3-7％甲酸的乙腈溶液定容至15-25mL，以10000r/min的速度离心2-4min，得上清液，将上清液按照与免疫亲和柱比例为10-25：1转移至免疫亲和柱中，3-7mL 0.2％吐温-PBS溶液、3-7mL水溶液依次淋洗小柱，3-7mL甲醇溶液洗脱，洗脱液氮气吹至近干，50％乙腈定容至2mL，得供试品溶液。