[发明专利]一种基于液滴微流控芯片的高通量自动捕获单细胞的方法在审
| 申请号： | 201611061683.7 | 申请日： | 2016-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN108117968A | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 秦建华;张晓庆;姜雷;苏文涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12M1/00 | 分类号： | C12M1/00;C12N5/00 |
| 代理公司： | 沈阳晨创科技专利代理有限责任公司 21001 | 代理人： | 郑虹 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高通量 流路 微流控芯片 自动捕获 液滴 单细胞捕获 出入口层 流路通道 液体流路 控制层 流体力学原理 单细胞悬液 可扩展性 气路通道 气体流路 通道出口 通道入口 药物反应 液滴生成 传统的 可控的 微流控 负压 两层 气压 吸入 下层 捕获 增殖 芯片 上层 分化 引入 检测 灵活 观察 | ||
1.一种液滴微流控芯片，其特征在于所述芯片由两层组成，上层为流路出入口层；下层为流路控制层；
所述流路出入口层有液体流路通道入口(1)和液体流路通道出口(2)；
所述流路控制层由单细胞捕获流路通道(3)、气路通道(4)、液滴生成单元(5)组成；
所述单细胞捕获流路通道(3)是一条由多个交互连接的U型通道构成的长通道，长通道两端分别连接液体流路通道入口(1)和液体流路通道出口(2)，每个U型通道的直通道均有与之平行的气体流路通道(4)，每个U型通道的直通道上分布着数个圆柱形凹陷小坑结构的液滴生成单元(5)。
2.按照权利要求1所述一种液滴微流控芯片，其特征在于：所述单细胞捕获流路通道宽100～300μm，U型通道的直通道长为40～50mm，直通道间距为0.5～1mm。
3.按照权利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述气路通道宽为200～500μm，长为40～50mm，间距为0.5～1mm。
4.按照权利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述单细胞捕获流路通道与气路通道间距为0.5～1.5mm。
5.按照权利要求1所述液滴微流控芯片，其特征在于：所述液滴生成单元为圆柱形凹陷小坑结构，共有6000～10000个，小坑直径为15～45μm，高80～200μm，小坑间距80～150μm。
6.按照权利要求1所述一种基于液滴微流控芯片的高通量自动捕获单细胞的方法，其特征在于采用上述液滴微流控芯片，按照以下步骤进行：
将上述制备的微流控芯片经60～90％乙醇浸泡，紫外照射30～60min灭菌处理后，将液体流路通道出口堵住，置于真空培养箱抽真空5～10min，随后，快速将单细胞悬液以5×103cells/mL～5×106cells/mL的细胞密度加入芯片入口，控制单细胞悬液流速在0.01m/s～0.05m/s之间，待全部液滴生成单元都充满单细胞悬液时，打开液体流路通道出口，将液体流路通道中多余液体排除，待细胞粘附于芯片底面，补加新鲜的高糖DMEM培养基，置于37℃培养箱培养。
7.按照权利要求6所述一种基于液滴微流控芯片的高通量自动捕获单细胞的方法的应用，其特征在于：所捕获的单细胞可在芯片的液滴结构中长期培养，并可应用于细胞增殖、分化以及药物筛选等方面。
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