[发明专利]一种实时监测5‑氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒在审
申请号: | 201611063177.1 | 申请日: | 2016-11-25 |
公开(公告)号: | CN107132347A | 公开(公告)日: | 2017-09-05 |
发明(设计)人: | 吴英松;刘天才;林冠峰;梁君瑜 | 申请(专利权)人: | 南方医科大学 |
主分类号: | G01N33/533 | 分类号: | G01N33/533;G01N21/64 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人: | 单香杰 |
地址: | 510515 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 实时 监测 嘧啶 浓度 时间 分辨 荧光 检测 试剂盒 | ||
1.一种实时监测5-氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒,包括其特征在于,包括浓度为0、10、50、100、750、1500 ng/mL的校准品5-FU、校准品稀释液、铕标5-FUA-OVA、抗5-FU鼠源多克隆抗体、分析缓冲液、洗涤液、增强液、羊抗鼠IgG包被的反应板;所述铕标5-FUA-OVA中5-FUA-OVA与Eu3+标记物的质量比为5:1,所述5-FUA-OVA中5-FUA与OVA的偶联质量比为10:1;所述抗5-FU鼠源多克隆抗体制备使用的抗原为5-FUA-KLH,所述5-FUA-KLH中5-FUA与KLH偶联摩尔比为20:1。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述5-FUA-OVA的制备方法为:将5-FUA溶于MES溶液中,加入EDC和NHS对其进行活化,活化后的5-FUA与溶于磷酸盐缓冲液的载体蛋白OVA偶联并纯化。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述铕标5-FUA-OVA抗原的制备方法,包括如下步骤:
S1.5-FUA-OVA中加入Eu3+标记试剂,充分混匀,25℃振荡过夜;
S2.用层析柱分离纯化,用洗脱液洗脱,收集流出液,逐管测量吸光度,合并峰管,测蛋白含量并计算标记率;
S3.稀释并管后的标记物,分装真空冷冻干燥。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗5-FU鼠源多克隆抗体的制备方法,包括如下步骤:
S1.5-FUA-KLH抗原的制备:将KLH溶解于磷酸盐缓冲液中,将5-FUA溶于MES溶液中,往5-FUA溶液中加入EDC和NHS,室温活化30min,将KLH加入反应液中,37℃避光反应过夜,用磷酸盐缓冲液透析24h,分装冻干;
S2.小鼠免疫:纯水溶解5-FUA-KLH抗原,免疫方式采用皮下多点注射免疫,每只Balb/c小鼠接种剂量为50μg,三周后同样对小鼠皮下多点注射,加强免疫2次;
S3. 测定血清效价, 血清效价高于1/128000时,收集小鼠血清,分装保存。
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