[发明专利]一种制备槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法

权利要求书

1.一种制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，步骤如下：

（1）将中药提取物溶于甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水中，制得中药提取物溶液；

（2）采用二维液相色谱分离纯化技术从中药提取物中制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷；采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或Click PN；采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18、反相C8或Click PN；Click PN的色谱柱为50×150 mm，5μ，

所述中药提取物为银杏叶提取物；

银杏叶提取物溶于体积浓度20%－80%的甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－2000 mg/mL；

一维液相色谱制备采用的流动相为甲醇、乙醇或乙腈，有机相，其中不含或质量浓度含0.1%甲酸与水相水混合，洗脱条件按照有机相5－60%等度或从0至15－60分钟有机相体积浓度由5%提高到80%线性梯度进行；对保留时间5－25分钟主成分为槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用体积浓度20%－70%的甲醇－水溶液溶解，至浓度为10－500 mg/mL；

对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备；采用的流动相为不含或质量浓度含0.1%甲酸的有机相的甲醇乙醇或乙腈与水相的水混合，洗脱条件按照有机相5－30%等度或经从0至15－60分钟有机相体积浓度由5%提高到30%梯度进行，收集槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷组分；

色谱柱规格为内径20-50厘米；制备时流动相流速为20－120 mL/min，制备时柱温为室温或25－40 ℃，制备时进样量为200－3000 μL/针；分离纯化技术为二维液相色谱制备结合质谱联用技术进行银杏叶提取物槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷的制备，检测器一维制备时为DAD紫外检测器、二维制备时为质谱检测器。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：银杏叶提取物溶于40－60%的甲醇－水、乙醇－水或乙腈－水溶液，银杏叶提取物浓度为250－550 mg/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：最佳二维色谱柱组合为一维为反相C18，二维为反相Click PN。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：一维制备最佳流动相为不含或含质量浓度0.1%甲酸的乙腈与不含或质量浓度含0.1%甲酸的水，采用线性梯度方式，乙腈相体积比例由10%经20－30分钟增加到30%－40%。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：一维制备收集12－18分钟为主要含槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷的组分，一维制备槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用体积浓度40%－60%的甲醇－水溶液制成浓度为20－200 mg/mL的槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品溶液；二维制备最佳流动相为不含或含质量浓度0.1%甲酸的乙腈与不含或含质量浓度0.1%甲酸的水，采用线性梯度条件，乙腈相体积比例由5%经25－35分钟增加到15%－25%。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：制备时流动相最佳流速为80－100 mL/min，制备时柱温为室温，制备时进样量为2000－2500 μL/针，紫外检测器为360 nm；将二维液相色谱制备收集到的槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷馏分进行旋转蒸发浓缩至干，得到槲皮素-3-O-2’’,6’’-二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。