[发明专利]一种基于微流控芯片的人Y-STR基因位点分型方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片的Y染色体STR位点分型方法，其特征在于：包括下列步骤：

(1) 选择电泳体系：进样缓冲液体系由50mmol/L三羟甲基氨基甲烷、50mmol/L N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸、1mmmol/L乙二胺四乙酸组成1×TTE缓冲液，pH8.3 ；样本分离体系由POP 4 或 POP 7胶组成；

(2) 选择电泳芯片：芯片包括样品池、样品废液池、缓冲液池、缓冲液废液池及十字管道；所述十字管道的横臂左右两端分别向垂直于纵臂方向延伸，并分别与缓冲液废液池及缓冲液池相通，十字管道的纵臂上端与样品池相通，十字管道的纵臂下端与通过U形延伸段后与样品废液池相通；在十字管道的交叉处与缓冲液废液池之间的横臂上设置检测点；

（3）芯片表面修饰：首先将芯片置于真空干燥器中抽真空10分钟；取出芯片，立即向芯片通道中加入1M NaOH 65℃保持15min，抽干NaOH，加入1M HCl，室温保持15 min，抽干后加入0.25% 聚N-羟乙基丙烯酰胺（pHEA），室温保持 1小时，最后以乙腈抽干微通道置于室温备用；

(4) Y染色体STR位点选择:选择五个Y染色体基因座位点分别是DYS459、DYS446、DYS443、DYS460和Y-GATA-A10；5个基因座分成两组，用HEX标记DYS459、DYS446和DYS443，用TAMRA标记DYS460和Y-GATA-A10，分子量内标用第三色荧光染料ROX标记，组成5个Y染色体STR基因座复合扩增体系；

(5) 电泳：用1×TTE缓冲液浸洗2 分钟；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样本；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样本；进样阶段，样品池0V，样品废液池+800V，缓冲液池+200V，缓冲液废液池+700V，进样10 秒后切换电压进入分离阶段；分离时，缓冲液废液池+3600V，缓冲液池0V，样品池和样品废液池均施加+900V，运行温度为25℃；得到五个Y染色体基因座位点的出峰时间。

2. 根据权利要求1 所述的一种基于微流控芯片的Y染色体STR位点分型方法，其特征在于：所述芯片大小为63mm×30mm，芯片管道宽90μm，深30μm，芯片样品池到十字交叉点长5mm，有效分离长度为160mm，样品池、样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池的直径均为2mm。