[发明专利]一种基于微流控芯片的肿瘤内渗模型的建立方法及应用

权利要求书

1.一种微流控芯片，其特征在于：该微流控芯片主要由细胞入口(1)、细胞培养室(2)和废液出口(3)组成；细胞培养室(2)上连细胞入口池(1)，细胞培养室(2)下连废液出口(3)。

2.一种基于微流控芯片的脑微血管炎症模型的建立方法，其特征在于采用上述微流控芯片，按照以下步骤进行如下：

(1)芯片修饰

将配制好的0.1mg/mL胶原工作液经由细胞入口加入芯片，将固定芯片的培养皿常温静置12-36小时，随后移除胶原工作液，细胞培养液冲洗通道2-4次，对通道底面进行修饰；

(2)芯片内细胞的接种与培养

提取纯化原代大鼠脑微血管内皮细胞，消化调整密度至1×10⁵-5×10⁵cells/mL，经由细胞入口加入到芯片中，细胞迅速贴壁并均匀铺展于细胞培养室底面，当在光学显微镜下观察到细胞在细胞培养室中均匀分布时，立即将芯片移入二氧化碳培养箱中继续培养；

(3)炎症脑微血管模型的建立

待脑微血管内皮细胞经过增殖完全铺满细胞培养室底面后，经由细胞入口向通道中加入以细胞培养液配制的10μMTNF-α溶液，并继续培养24小时，使脑微血管内皮细胞对TNF-α分子产生相应，模拟脑微血管炎症模型。

3.一种基于微流控芯片的脑微血管炎症模型的应用，其特征在于该模型用于脑微血管炎症模型的肿瘤内渗研究，方法过程如下：

(1)细胞灌注

将肺癌细胞(A549细胞)消化调整至1×10⁵-5×10⁵cells/mL，经由细胞入口灌注到芯片中，调整灌流速度，使得流体剪切力大小为1dyne/cm²。通过屏幕录像软件记录A549细胞在脑微血管内皮细胞表面的滚动和黏附现象；以无细胞培养液连续灌流10分钟，选择6个随机区域拍照，统计分析紧密粘附的A549细胞数；

(2)粘附抑制

将肺癌细胞(A549细胞)消化调整至1×10⁵-5×10⁵cells/mL，同时加入Y27632，终浓度为10nM，以同样方法灌注并统计分析紧密粘附的A549细胞数。