[发明专利]一种基于银纳米探针的端粒酶活性比色检测方法

权利要求书

1.一种用于端粒酶活性检测的试剂盒，其特征在于：包括用于检测端粒酶活性的银纳米探针、5×TRAP缓冲液、dNTPs溶液、BSA溶液和水；所述银纳米探针包括银纳米粒子和修饰在银纳米粒子表面的平末端杂交双链，所述杂交双链由单链DNA和与所述单链DNA部分互补的核苷酸序列杂交而成，所述单链DNA由连续胞嘧啶链、间隔链和端粒酶结合底物链依次连接而成，所述核苷酸序列与端粒酶结合底物链完全互补，所述杂交双链通过连续胞嘧啶链修饰在银纳米粒子的表面；连续胞嘧啶链中的胞嘧啶的数量为10-30个；间隔链为连续胸腺嘧啶间隔链T_n，其中n为连续胸腺嘧啶的个数，为4-6；所述5×TRAP缓冲液的组成包括：100mM Tris-HCl、7.5mM MgCl₂、315mM KCl、0.025％Tween-20和5mMEGTA，TRAP缓冲液的pH值为8.3；所述端粒酶结合底物链为AATCCGTCGAGCAGAGTT。

2.如权利要求1所述的一种用于端粒酶活性检测的试剂盒，其特征在于：所述银纳米探针的制备方法包括如下步骤：

一条由连续胞嘧啶链、间隔链和端粒酶结合底物链依次连接而成的短链DNA与另一条互补DNA预杂交，得到杂交双链，互补DNA与所述端粒酶结合底物链完全互补；所述杂交双链与银纳米粒子按设定比例混合，在混合液中加入缓冲液，培育后得到银纳米探针。

3.根据权利要求2所述的一种用于端粒酶活性检测的试剂盒，其特征在于：所述预杂交时，将等摩尔的短链DNA与互补DNA混合后，在95-100℃退火8-15min，缓慢冷却后，即得。

4.根据权利要求2所述的一种用于端粒酶活性检测的试剂盒，其特征在于：银纳米探针的培育方法，包括如下步骤：

1)将杂交双链与银纳米粒子的混合液在室温条件下，搅拌1.5-2.5h；

2)向混合液中加入柠檬酸缓冲液，使柠檬酸的最终浓度为3.5-4.5mM，培育25-35min；

3)向混合液中继续加入柠檬酸缓冲液，使柠檬酸的最终浓度为7.5-8.5mM，培育25-35min；

4)向混合液中加入磷酸盐缓冲液，使磷酸盐的最终浓度为20-22mM，培育55-65min，即得。

5.权利要求1-4任一所述用于端粒酶活性检测的试剂盒在检测端粒酶活性中的应用，用于非疾病诊断或治疗中。