[发明专利]一种生防菌长枝木霉T6水分散粒剂的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种生防菌长枝木霉T6水分散粒剂的制备方法及其应用。

背景技术

长枝木霉T6，属于半知菌门，开始时为白色，致密，圆形，向四周扩展，生长一段时间后从菌落中央产生绿色孢子，中央变成绿色。菌落生长迅速、有明显的轮纹，周围有白色菌丝的生长带。最后整个菌落全部变成绿色。长枝木霉 T6具有较强的适应性，在15～40℃之间都能生长和产孢。在25～35℃之间菌丝生长较好，在25～35℃之间产孢较多。

本发明以土壤中分离得到的一株拮抗菌——长枝木霉T6Trichoderma longibrachiatum T6保藏编号CGMCC13183为研究对象，通过优化培养基配方及助剂类型的筛选，成功研制了长枝木霉T6水分散粒剂，并测定了其贮存稳定性，还研究了该水分散粒剂对黄瓜、番茄、辣椒、油菜和白菜株高、基部茎粗、地上鲜重、根系长度、根系鲜重,叶绿素、可溶性蛋白、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的影响，以及对黄瓜立枯病、辣椒立枯病和油菜根腐病的防治作用。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种生防菌长枝木霉T6水分散粒剂的制备方法及其应用。

本发明的技术方案如下：

一种生防菌长枝木霉T6水分散粒剂的制备方法，包括以下步骤：

A、长枝木霉T6母药制备：将30％的固体菌种接入最佳基质中进行大量培养，得到长枝木霉T6母药；

B、长枝木霉T6母药助剂的筛选：分别测定了紫外保护剂、稳定剂、黏结剂、崩解剂、载体和润湿剂对长枝木霉T6产孢量及其孢子萌发率的影响，选择合适的母药助剂；

C、挤压造粒：使用鼓风干燥机将长枝木霉T6母药干燥后制成母粉，在母粉中按照筛选好的比例添加紫外保护剂、稳定剂、崩解剂、载体、湿润剂等助剂，混匀后向混合物中加入黏结剂水溶液(5％)，使含水量保持在33-38％，然后加入造粒机造粒，干燥后得到水分散粒剂；

优选的，所述的步骤A中，所述的最佳基质为草炭、蛭石和牛粪。

优选的，所述的草炭、蛭石和牛粪的重量比为1:1:1。

优选的，所述的步骤B中，长枝木霉T6产孢量的测定，包括以下步骤：称取1g长枝木霉T6母药或添加不同助剂的母药，加入100mL无菌水，滴入0.05 mL吐温-80，置于磁力搅拌器，20min后过滤，用血球计数板统计长枝木霉T6 分生孢子数量；每个处理3次重复。

优选的，所述的步骤B中，长枝木霉T6孢子萌发率的测定：将添加不同助剂长枝木霉T6母药用标准的PDB培养液配制成浓度为10⁶cfu·g^-1的孢子悬浮液，以PDA培养基的分生孢子作为对照；采用悬滴法：将0.1mL已稀释好的长枝木霉T6孢子悬浮液置于盖玻片上，迅速将其翻转，盖于有凹面的载玻片上，放入铺有湿润滤纸的培养皿中；于28℃下暗培养17h，在显微镜下测定孢子萌发率；每处理统计100个左右孢子，3次重复。

本发明以土壤中分离得到的一株拮抗菌——长枝木霉T6Trichoderma longibrachiatum T6生物保藏编号CGMCC13183，保藏日期2016年11月14日，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址中国北京。为研究对象，通过优化培养基配方及助剂类型的筛选，成功研制了长枝木霉T6水分散粒剂，并测定了其贮存稳定性。结果表明：制备长枝木霉T6水分散粒剂助剂的最佳配方(质量分数)为：羧甲基纤维素(紫外保护剂)0.5％，碳酸钙(稳定剂) 4％，聚乙烯基吡咯烷酮(PVP，黏结剂)5％，可溶性淀粉(崩解剂)5％，凹凸棒土(载体)5％及十二烷基硫酸钠(润湿剂)5％。由此配方制备的水分散粒剂中孢子含量为5.6×10⁸cfu·g^-1，悬浮率53％，pH值6.0，水分含量3.5％，湿润时间52 s，且在冷藏温度为(4±2)℃条件下的稳定性显著高于在室温(25℃)下的。各项检测结果均符合国家标准。

附图说明

图1：不同贮藏方式对长枝木霉T6水分散粒剂孢子萌发率的影响图。

图2：长枝木霉T6水分散粒剂对叶绿素含量的影响图。

图3：长枝木霉T6水分散粒剂对可溶性糖含量的影响图。

图4：长枝木霉T6水分散粒剂对可溶性蛋白含量的影响图。

图5：长枝木霉T6水分散粒剂对过氧化物酶活性的影响图。

图6：长枝木霉T6水分散粒剂对苯丙氨酸解氨酶活性的影响图。