[发明专利]SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法

权利要求书

1.一种SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，其特征在于，利用螯合锌离子的介孔分子筛SBA-15为载体，以血管紧张素转化酶为固定对象，通过吸附与键和作用，得到SBA-15固定化血管紧张素转化酶；

具体步骤为：

S1、取孔径为6～7nm的介孔分子筛SBA-15通过直接或间接吸附螯合的方式制得螯合Zn²⁺的介孔分子筛SBA-15；

所述直接螯合的具体操作为：

将介孔分子筛SBA-15与浓度为0.05～0.06mol/L的ZnSO₄水溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡45～65min，获得直接螯合Zn²⁺的SBA-15载体；

所述间接螯合的具体操作为：

将介孔分子筛SBA-15加入到无水乙醇中，向所述无水乙醇中加入3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，20～30℃水浴震荡10～20h，反应结束后抽滤，收集固体物质，洗净；

所述介孔分子筛SBA-15与无水乙醇、3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的质量体积比为1:350～400:20～30(g/mL/mL)；

将所得固体物质与浓度为0.6～0.8mol/L的亚氨基二乙酸溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡反应60～90min，反应结束后抽滤，再次收集固体物质；

将再次收集的固体物质与浓度为0.05～0.06mol/L的ZnSO₄溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡60～90min，获得间接螯合Zn²⁺的SBA-15载体；

S2、固定血管紧张素转化酶：将步骤S1制得的螯合Zn²⁺的介孔分子筛SBA-15与血管紧张素转化酶溶液按质量体积比1:5～20(g/mL)的比例混合，45℃～50℃，在水浴锅中水浴震荡30～40min，至反应液中的蛋白含量不变，反应结束；抽滤、清洗、除去未吸附结合的血管紧张素转化酶，得到SBA-15固定化血管紧张素转化酶；

所述血管紧张素转化酶溶液以pH为7.8～9.3的硼酸盐缓冲溶液配置，浓度为10～50mg/mL，酶活为0.1～0.2U/mL。

2.根据权利要求1所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，其特征在于，步骤S1采用间接螯合的方法制备螯合Zn²⁺的介孔分子筛SBA-15。

3.根据权利要求1所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，其特征在于，步骤S1所述介孔分子筛SBA-15的制备方法为：

按质量体积比为1:50(g/mL)将聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物溶于浓度为1.4～1.6mol/L的盐酸溶液中，30～35℃水浴搅拌3～5h；然后逐滴加入正硅酸乙酯至与聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物的体积质量比为4～6:1(mL/g)的体积时终止，40～50℃水浴持续搅拌18～24h；随后将反应物转移至反应釜中，100～120℃静置条件下反应20～26h；收集固体产物，水洗抽滤干净后，70～90℃烘干10～14h，550℃焙烧6～10h，得到介孔分子筛SBA-15。

4.根据权利要求1所述SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，其特征在于，步骤S2所述血管紧张素转化酶溶液采用粗提猪肺血管紧张素转化酶配置。