[发明专利]一种提高发酵生产丁醇产量的方法

权利要求书

1.一种提高发酵生产丁醇产量的方法，其特征在于包括如下内容：

（1）种子活化：将丁醇发酵菌接入无氧的RCM培养基中活化；所述的丁醇发酵菌为丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum)或拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii）；

（2）厌氧发酵：制备P2发酵培养基，灭菌除氧后接入步骤（1）活化好的丁醇发酵菌种子液，进行厌氧发酵；所述P2发酵培养基以g/L计为：总糖60，酵母粉 1.0，CH₃COONH₄ 2.2，KH₂PO₄ 0.5，K₂HPO₄ 0.5，MnSO₄ 0.01，NaCl 0.01，MgSO₄·7H₂O 0.2，FeSO₄ 0.01，对氨基苯甲酸 0.001，维生素B1 0.001，生物素0.01e-3，115℃灭菌20min；

（3）发酵调控：当厌氧发酵进入指数期后，加入适量添加剂，所述添加剂为GHK-Cu²⁺、肌醇、水溶性胆固醇中的一种或几种，之后持续厌氧发酵至结束。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的RCM培养基配方以g/L计为：蛋白胨10，牛肉粉10，酵母粉3.0，葡萄糖5.0，可溶性淀粉1.0，氯化钠5.0，醋酸钠3.0，L-半胱氨酸盐酸盐0.5，琼脂0.5，以纯水配置，115℃灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的种子活化是将丁醇发酵菌的芽孢液接入RCM培养基中，于36-38℃下厌氧培养16-20h得到种子液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的糖为五碳糖或六碳糖。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的糖为葡萄糖、木糖中的一种或两种。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）、（2）中培养基通过先利用厌氧工作站，再添加除氧剂的方式除氧，除氧剂为1g保险粉与0.6g碳酸钠溶于10mL纯水制得。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）按照培养基体积比5%-10%接入活化的丁醇发酵菌种子液；厌氧发酵的温度为35-38℃，发酵时间为96-120h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述厌氧发酵12-36h后加入添加剂。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述的添加剂采用0.22um滤膜过滤后补加。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述的添加剂首先制备成浓度分别为5g/L，10g/L，1g/L的母液，再稀释50-200倍，然后利用0.22um滤膜过滤后补加。