[发明专利]一种快速生产除虫菊酯的方法

说明书

本发明公开了一种快速生产除虫菊酯的方法，直接利用除虫菊花药培养出愈伤组织，再从愈伤组织中结合涡旋振荡和超声萃取提取出除虫菊酯，本发明培养速度快，萃取时间短，可快速、高效地生产除虫菊酯。

技术领域

本发明涉及农药技术领域，特别是一种快速生产除虫菊酯的方法。

背景技术

除虫菊(Py rethrum cinerariifolium Trev .) 原产欧洲，对它的研究和利用已有近百年历史(Casida，1973)，本世纪初除虫菊在世界各地广泛栽培，40 年代起曾在我国华东、新疆、贵州和云南等省区引种，近期出现品种退化，直接影响干花的产量和质量。在50年代至70 年代世界除虫菊干花的主产国一度受到人工合成杀虫剂的冲击，80 年代以来随着人们对环境保护意识的增强，除虫菊的应用研究又重新得到亲睐，利用除虫菊的头状花序(简称花头) 经抽提和加工后获得的除虫菊酯，因除虫菊酯对人体(包括哺乳动物) 无毒、无积累，而使得除虫菊干花再次赢得市场，但近期世界原除虫菊干花生产国，因受多种因素干扰产量直线下降(Casida , 1973)，重新寻找新的生产基地已势在必行。

除虫菊一般以种子、扦插繁殖为主，但目前品种分化严重，含量降低，同时如果植株受根结线虫及病毒的侵染，还会成为带毒植株，不能使用，综合上述原因，目前依靠除虫菊干花抽提和加工获得的除虫菊酯的方法已不能满足生产需要。

除虫菊酯的提取方法，主要有超临界萃取、微波萃取，沙氏提取法和超声波法等。超临界萃取和微波萃取现已成功广泛应用于工业除虫菊酯的提取，如云南红河森菊生物有限公司利用超临界 CO₂萃取，其产品纯度高达 75%。除虫菊花在超声波法萃取过程中，使细胞内部的压力增大，当内部压力超过细胞壁可承受的能力时，细胞壁破裂，于是位于除虫菊花细胞内的除虫菊酯Ⅰ、除虫菊酯Ⅱ、瓜叶菊酯Ⅰ、瓜叶菊酯Ⅱ、茉酮菊酯Ⅰ、茉酮菊酯Ⅱ的有效成分自由流出，进入萃取溶剂而被溶解，过滤去残渣，即可达到从除虫菊花内萃取除虫菊酯的目的。用超声波协助萃取技术应用于天然除虫菊花中提取杀虫活性成分，具有快速安全、节省能源、降低劳力消耗、降低溶剂用量的优点，因此，开发一种结合超声波萃取技术快速生产除虫菊酯的方法是极有必要的。

发明内容

本发明提供了快速生产除虫菊酯的方法，直接利用除虫菊花蕾培养出愈伤组织，再从愈伤组织中提取出除虫菊酯，该方法可快速、高效地获得除虫菊酯，且除虫菊酯的品质少受种植环境和病虫害的影响。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种快速生产除虫菊酯的方法，包括以下步骤：

（1）选无性系个体为母株，取其花蕾作外植体，当花蕾长至长度为0.4~0.8 cm时，将花蕾用70~80%的乙醇水溶液浸泡20~60s，取出再放入0.1~0.3wt%的消毒水浸泡15min，再用无菌水冲洗3~5次；

（2）在无菌条件下，从花蕾中剥取花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织，先在20~25 ℃暗培养13~16 d，然后在20~28℃下进行光照培养13~16d，光照14 ~16h/d，光强2000~3000lx；

（3）待愈伤组织长到花药重量的50~100倍时，取出愈伤组织捣碎，加入正己烷作为提取剂，涡旋振荡40~120s，静置25~60min，超声萃取10~30 min，离心，取上清液，加入2~3%的硫酸钠水溶液，振摇，收集上层有机相，经吸水的干燥剂干燥后，浓缩，浓缩液加入PSA和C₁₈涡旋振荡，离心，取上清液，获得除虫菊酯产品。

进一步的，所述步骤（1）中，消毒水为升汞水溶液。

进一步的，所述步骤（2）中，所述诱导培养基为：MS +2,4-D 1.0 mg/ L +BA 1.0mg/ L+IAA 0.5 mg/ L+NAA0.25 mg/L +蔗糖50 g/L +琼脂7 g/L，pH值为5.4~5.6。