[发明专利]一种布鲁氏菌诊断标识作用的基因表达产物BLSJ-1及其制备方法

说明书

本发明涉及一种布鲁氏菌诊断标识作用的基因表达产物BLSJ‑1及其制备方法。该产物是由布鲁氏菌S2株基因编号(GI)为489054867的基因原核表达，并经谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析柱与谷胱甘肽梯度洗脱法纯化获得。将该产物作为包被抗原，可作为区分动物布鲁氏菌疫苗免疫和自然感染血清检测的诊断抗原。将该抗原分别与疫苗免疫抗体及自然感染抗体进行免疫印迹(Western‑blot)，差异明显。将BLSJ‑1抗原作为间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)包被抗原，检测数百份布病临床血清样本，鉴别诊断效果显著。

技术领域本发明涉及一种布鲁氏菌诊断标识作用的基因表达产物BLSJ-1及其制备方法，属于兽医微生物学诊断领域。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis简称为布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的人畜共患传染病。人感染布病主要来于患病动物及其产品。我国与人类布病有关的传染源主要是患病羊、牛，但以羊种布鲁氏菌危害最为严重(朱良全et al.微生物学通报,2015(01):171～177；吴清民.兽医导刊,2011(09):46～47)。

血清学方法是当前诊断动物布病的主要方法，而疫苗接种是预防动物布病的重要手段。布病已有的血清学诊断主要基于检测抗布鲁氏菌脂多糖抗体，由于我国现有动物布病疫苗株(S2、A19和M5)与野毒感染株均属于光滑型菌株，均诱导机体产生抗脂多糖抗体，因而无法通过现有血清学方法区分疫苗免疫和自然感染(毛开荣,等.动物布鲁氏菌病诊断技术.中国农业出版社，2014.)。

不过，强弱毒布鲁氏菌感染宿主后的血清学抗体应答出现明显差异，为从血清学上筛选区分自然感染与疫苗免疫的鉴别诊断抗原提供了一些背景和线索。如已有研究表明，强毒感染布鲁氏菌后，7天可检测到抗体，15天抗体水平达到最高，其凝集抗体滴度达到1：3000，随后开始下降，60天后抗体水平已经低于7天时的抗体水平，而240天后抗体为阴性(Gao XL.et al Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences,2015,39:271～278)。而布鲁氏菌疫苗S2免疫绵羊后，2周后开始检测到抗体，第30天抗体水平达到最高，其滴度为1:120，随后开始下降，至180天后抗体为阴性。上述显示的免疫与自然感染血清之间的差异信息为鉴别诊断点的筛选开辟了新思路。

据报道，膜蛋白占据病原微生物总蛋白质的大约30％～40％，不仅是治疗药物和疫苗开发的主要靶点所在，而且含有保护性抗原成分，因而成为布鲁氏菌诊断抗原和药物治疗靶点研究的重点对象(胡剑飞，等.疾病监测,2010(05):380～389；吴朔,等.免疫学杂志,2008(04):385～388)。由于免疫蛋白组学方法可显示蛋白血清学反应差异信息，并可运用生物信息学技术作为高通量筛选的技术平台，从膜蛋白中获取大量可能的鉴别诊断抗原信息，从而破解疫苗免疫与自然感染的难题。

发明内容

本发明的目的是针对现有血清学方法无法区分布鲁氏菌疫苗免疫抗体和自然感染抗体难题，提供具有鉴别诊断价值的布鲁氏菌基因表达产物，运用免疫学方法，从而实现疫苗免疫抗体及自然感染抗体的鉴别诊断。

本发明技术方案

1.一种布鲁氏菌诊断标识作用基因的表达产物BLSJ-1，其特征在于该产物是由布鲁氏菌S2株基因编号(GI)为489054867的基因，表达为“通用应激蛋白(universal stressprotein)”；该基因长度：450bp；其表达产物的蛋白分子量约15.5kDa。其基因序列为序列1：

2.本发明所述的一种布鲁氏菌诊断标识作用基因的表达产物BLSJ-1的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)基因筛选：从布鲁氏菌S2株基因组中，通过免疫蛋白组学方法，筛选鉴定出上述权利1的基因；