[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基

说明书

本发明涉及一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基，细胞生长因子、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂、亚硒酸钠。通过本发明提供的间充质干细胞无血清培养基所获得的细胞，不仅可避免血清培养基所携带的病原体污染造成纯化细胞困难的问题，而且能够提高细胞生产的稳定性、提高细胞增殖量，以及增强细胞活性。

技术领域

本发明在于干细胞培养基及方法领域。

背景技术

诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞培养是研究干细胞的作用机制及探索其在治疗人类疾病治疗方法的重要技术。

干细胞尽量含量甚微，但广泛分布于哺乳动物的各个组织器官，这些组织或器官包括但不局限于骨髓、脐带、脂肪组织、脑组织、视网膜、心脏、肝脏、肺以及皮肤等。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)，是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，这种干细胞能够发育成硬骨、软骨、脂肪和其他类型的细胞。间充质干细胞可以接受移植，而它们会成长为何种类型的细胞取决于其被注入的部位。例如，被注入心脏的间充质干细胞能够形成健康的新组织等。1976年，Freidenstein首次发现在骨髓里存在一群不纯一的细胞群体，这种细胞在体外培养时贴壁生长，形态和成纤维细胞相似，呈克隆性增殖，并提出“骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)的概念。后经过深入和广泛的研究，发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。人类对间充质干细胞的生物学特性、来源、诱导分化、前期临床应用等取得了长足的进展。

目前，在干细胞的常规培养体系中均加入了一定比例的动物血清，比较常用的是胎牛血清或新生小牛血清。血清是由很多大小不同生物分子组成的极为复杂的混合物，它对细胞在体外培养时的主要作用是提供生长因子、激素、结合蛋白，并提供保护作用。但它也含有一些不利于细胞生长的抑制因子或毒性物质，具有潜在的细胞毒性作用。血清中大量成分复杂的蛋白质，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞培养表达产品分离纯化带来很大的困难。而且动物血清可能存在动物携带的已知或未知病原体，对以后可能的临床应用构成威胁，对用于规模化培养细胞增加了难度。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种无毒性且无污染的间充质干细胞无血清培养基，旨在减少血清成分的引入的问题。

本发明的技术方案如下：

一种间充质干细胞无血清培养基，其中，所述培养基组分包括基础培养基，细胞因子、含铁的食品添加剂、谷氨酰胺和亚硒酸钠；

所述基础培养基为DMEM高糖培养基；

所述的细胞因子为人表皮生长因子、甲状腺素、肾上腺素和胰岛素中一种或者多种；

所述含铁的食品添加剂包括转铁蛋白、柠檬酸铁、葡萄糖酸铁中一种或多种。

在本发明提供的间充质干细胞无血清培养基中，所述间充质干细胞无血清培养基中，细胞因子的浓度为1-30μg/ml、谷氨酰胺的浓度为1-5mmol/L、含铁的食品添加剂的浓度为1-25ug/ml、亚硒酸钠的浓度为1-20ng/ml。

本发明进一步提供一种干细胞的培养方法，包括如下步骤：

获取间充质干细胞，采用上述的间充质干细胞无血清培养基进行体外培养。