[发明专利]一种用于肌氨酸的电化学检测方法

权利要求书

1.一种用于肌氨酸的电化学检测方法，其特征在于，所述电化学检测方法包括如下步骤：

S1，利用物理吸附或者化学偶联的方法将肌氨酸氧化酶SOX和第一核酸序列连接，得到第一核酸序列修饰酶；将过氧化物酶Peroxidase和第二核酸序列连接，得到第二核酸序列修饰酶；

S2，提供第一核酸纳米结构，其上伸出第一识别序列；提供第二核酸纳米结构，其上伸出第二识别序列；

S3，第一核酸序列修饰酶与第一识别序列杂交，得到肌氨酸氧化酶SOX和核酸纳米结构的第一复合体；第二核酸序列修饰酶与第二识别序列杂交，得到过氧化物酶Peroxidase和核酸纳米结构的第二复合体；

S4，将第一复合体和第二复合体组装到电化学装置的工作电极表面，利用第一复合体中的肌氨酸氧化酶SOX催化肌氨酸生成双氧水，利用第二复合体中的过氧化物酶Peroxidase催化酶催化底物TMB和双氧水的电化学反应，产生电流信号进行电化学检测；

所述步骤S1包括：

S11，将3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯SPDP和肌氨酸氧化酶SOX、过氧化物酶Peroxidase进行连接，得到SPDP活化酶；

S12，将SPDP活化酶和巯基核酸序列进行反应，得到核酸序列修饰酶，其中，巯基核酸序列是利用巯基对序列为SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的核酸进行修饰的DNA链。

2.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S11中的SPDP活化酶通过超滤进行纯化，并通过紫外进行定量。

3.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S12中的SPDP活化酶和巯基核酸序列的摩尔比为1:1-1:50。

4.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S12中核酸序列修饰酶通过超滤进行纯化，并通过紫外进行定量。

5.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的核酸纳米结构为一维、二维或三维的DNA纳米结构。

6.根据权利要求5所述的电化学检测方法，其特征在于，所述第一核酸纳米结构为四面体DNA纳米结构，其通过序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5的四条单链DNA自组装形成；所述第二核酸纳米结构为四面体DNA纳米结构，其通过序列为SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5的四条单链DNA自组装形成。

7.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S4中的第一复合体和第二复合体的摩尔比为0.5:1-20:1。

8.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S4中的电化学装置的工作电极是由碳电极和金电极组成的平板电极，或由印刷碳电极和印刷金电极组成的薄膜印刷电极。

9.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S4中的电化学装置的电解槽中加入不含双氧水的酶催化底物TMB和待测肌氨酸样本。