[发明专利]一种基因工程菌生产β-胡萝卜素的方法及其基因工程菌在审
| 申请号： | 201611082146.0 | 申请日： | 2016-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN108118007A | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 陈少欣;尹升明;吴运杰;杨松柏 | 申请（专利权）人： | 上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P23/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;沈利 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因工程菌 胡萝卜素 脂酵母 磷酸甘油脱氢酶 过氧化物酶 解脂酵母菌 三孢布拉霉 发酵条件 基因工程 异源表达 基因 还原酶 焦磷酸 辅酶A 儿基 合酶 敲除 羟基 生产 引入 | ||
1.一种含有carRA基因和carB基因的耶罗维解脂酵母(Yarrowia lipotica)基因工程菌。
2.如权利要求1所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的carRA基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示；所述的carB基因的核苷酸序列如序列表中SEQID NO.4所示。
3.如权利要求1所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步含有GGS基因。
4.如权利要求3所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的GGS基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；或者，
所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌的制备方法包括以下步骤：将包括采用含有carRA基因、carB基因和GGS基因的重组载体导入耶罗维解脂酵母即可；优选的，所述的含有carRA基因、carB基因和GGS基因的重组载体，由包括以下步骤的方法构建而得：克隆来源于三孢布拉霉的carRA基因、carB基因，在其上游和下游连接来源于耶罗维解脂酵母的启动子和终止子，使其成为完整的表达元件，并与GGS基因的表达元件整合到一个质粒上，即获得的重组载体；优选的，所述的重组载体是质粒pS-B-RA-GGS-F-U(L)；或者，
所述的carB基因，carRA基因和GGS基因在所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌中的拷贝数大于1个，较佳的为2-100个，甚至1000个。
5.如权利要求1或3所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步含有HMG-CoA还原酶的活性部位基因，优选HMG-CoA还原酶的催化部位。
6.如权利要求5所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌的制备方法包括以下步骤：用含有HMG-CoA还原酶活性部位基因的重组表达载体导入耶罗维解脂酵母即可；优选的，所述的重组表达载体是质粒pSK-Hmg(y)-Ura3-IntB，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。
7.如权利要求1或5所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步敲除了Gut2基因；和/或，所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步敲除了Pox2基因。
8.如权利要求7所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的敲除方法包括以下步骤：采用质粒pS-B-RA-GGS-Gut2-U(L)敲除，该质粒的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO.7所示。
9.如权利要求7所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌，其特征在于，所述的敲除方法包括以下步骤：采用质粒pS-B-RA-GGS-Pox2-U(L)敲除，该质粒的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO.8所示。
10.一种基因工程菌生产β-胡萝卜素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备如权利要求1所述的含有carRA基因与carB基因的耶罗维解脂酵母基因工程菌；
2)发酵培养步骤1)所得的耶罗维解脂酵母基因工程菌，从发酵液中获得β-胡萝卜素。
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