[发明专利]一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法

权利要求书

1.一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

（1）当小麦单倍体胚生试管苗长至2-3片叶、有根时，转入温度、光照强度、光照时长可设定的壮苗用培养箱进行壮苗预培养；

（2）壮苗用培养箱中50%的试管苗达到三叶期时，将此试管苗转移至壮苗培养基中，培养瓶灼烧后封口，置于壮苗用培养箱内进行壮苗培养；

（3）壮苗培养2-3周后，向培养瓶中无菌添加1号营养补给液，培养瓶灼烧后封口，置于壮苗用培养箱内继续进行壮苗培养，以后每隔2周向培养瓶内添加与1号营养补给液体积相同的2号营养补给液；

（4）试管苗产生2-3个分蘖时，转入温度、光照强度、光照时长可调节的越夏用培养箱进行越夏培养，每2周向培养瓶内无菌添加2号营养补给液；

（5）10月下旬到11月上旬，将试管苗的培养箱培养条件恢复至壮苗用培养箱的培养条件，并准备试管苗移栽用地；

（6）移栽用地准备好后，田间气温降至15℃以下时，试管苗进行移栽前炼苗，每天向培养瓶内无菌添加2次2号营养补给液；

（7）炼苗2-3天后，以2号营养补给液做为移栽定根水，进行试管苗的露地移栽；

其中，1号营养补给液的配置方法为：将硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾用水溶解，加入用95%乙醇溶解的多效唑，其中，硝酸铵 1650 mg/L、硝酸钾1900 mg/L、磷酸二氢钾 170 mg/L、多效唑0.5 mg/L，调节pH值至5.6-5.8，灭菌，4℃下保存期限为2周；

2号营养补给液的配置方法为：将硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾用水溶解，其中，硝酸铵1650 mg/L、硝酸钾1900 mg/L、磷酸二氢钾 170 mg/L，调节pH值至5.6-5.8，灭菌，4℃下保存期限为2周；

壮苗培养基的配方为MS大量元素、MS微量元素、MS铁盐、MS有机物质、多效唑0.5 mg/L、蔗糖30g/L，琼脂6.5 g/L，pH值5.6-5.8。

2.根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：壮苗用培养箱的培养条件为：13-14℃、11h光照和13h黑暗，其中11h的光照强度为2000-3000lx。

3.根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：步骤（3）中1号营养补给液的加入的体积为步骤（2）壮苗培养基体积的0.25倍。

4.根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：越夏用培养箱的培养条件为：4-7℃、10h光照和14h黑暗，其中10h的光照强度为2000-3000lx。

5.根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：步骤（4）中2号营养补给液加入的体积与步骤（3）相同。

6. 根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：步骤（6）中移栽前炼苗的具体操作为：将培养瓶移到培养架上，在20℃、12h光照度为5000-10000lx的光照和12h黑暗的条件下，敞开培养瓶的瓶口进行移栽前炼苗，同时在培养架隔板间喷雾以增加瓶口周围湿度。

7.根据权利要求1或6所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：步骤（6）中2号营养补给液的加入量为步骤（4）中2号营养补给液加入量的20%，每天向培养瓶内无菌添加2次2号营养补给液的时间分别为上午9时和下午17时。

8.根据权利要求1所述的一种小麦单倍体胚生试管苗的培养方法，其特征在于：无菌添加1号营养补给液或2号营养补给液的具体操作为：在无菌条件下，将培养瓶的瓶口敞开，用无菌移液管转移1号或2号营养补给液至培养瓶内，灼烧瓶口，然后封口。