[发明专利]一种高效稳定的筛选抗骨质疏松药物的方法

说明书

本发明介绍建立一种高效稳定的骨质疏松模型用来筛选抗骨质疏松药，此方法用糖皮质激素进行骨质疏松造模，通过控制给药剂量和频次，建立骨质疏松，在此模型上进行抗骨质疏松药物的筛选。

技术领域

本发明涉及的是建立一种新的骨质疏松造模，在此模型上进行抗骨质疏松药物的筛选。

背景技术

骨质疏松是以骨量减少、骨组织显微结构退化为特征，以致骨的脆性增高而骨折危险性增加的系统性多病因的一种全身骨骼疾病，素有“隐形杀手”之称。“木陈变朽,人老骨脆”,但此“变”非常隐匿,早期毫不知晓。随着年龄增长,骨脆性增加, 轻微的摔跌和磕碰就可能发生骨折,这无疑和骨质疏松有关。糖皮质激素性骨质疏松是在使用糖皮质激素治疗疾病过程中引起的骨量丢失,以骨量减少,骨微结构破坏,骨强度下降为特征的一种疾病,它会导致骨脆性增强,使患者易于发生骨折。

糖皮质激素是由肾上腺束状带合成和分泌的一类甾体激素，主要为皮质醇，有氢化可的松和可的松等，其分泌和生成受促皮质素的调节。糖皮质激素作用广泛且复杂，随剂量不同而异。生理情况下所分泌的糖皮质激素主要影响物质代谢过程，调节糖、脂肪、蛋白质的生物合成和代谢。超生理剂量的糖皮质激素有抑制免疫应答、抗炎、抗休克等药理作用。其在临床上已经广泛应用于自身免疫性疾病、系统性红斑狼疮、肾病综合征、特发性血小板减少性紫癜、系统性硬化等多种疾病的治疗，其不良反应是会引起机体物质代谢紊乱，破坏机体的免疫防御系统并抑制机体的免疫反应能力，因此，长程、大剂量使用激素时应合理用药和预防不良反应的发生。

研究表明，糖皮质激素主要是直接作用于成骨细胞、破骨细胞和骨细胞。降低成骨细胞的生成、促进成骨细胞和骨细胞的凋亡，以及延长破骨细胞的寿命，同时减少血管内皮生长因子、骨骼血管，骨间质液，骨强度。

糖皮质激素能够抑制骨形成，首先通过促进成骨细胞凋亡：有研究认为糖皮质激素对成骨细胞具有抑制作用，其抑制效应主要是导致成骨细胞的凋亡，且主要发生在G1细胞分裂期。研究发现糖皮质激素导致细胞凋亡和影响细胞周期的作用主要与糖皮质激素受体有关，当应用糖皮质激素受体阻滞剂后，其抑制效应也相应的消失。其次抑制成骨细胞分化和降低成骨功能：有学者研究发现，糖皮质激素减少成骨谱系细胞的复制，并且在成骨分化或矿化条件下，抑制成骨分化使成骨细胞群处于未成熟状态，从而降低了成骨细胞的数量和功能。此外，BMP-2 诱导基质细胞骨表型分化，糖皮质激素则诱导基质细胞成脂分化。研究表明糖皮质激素还抑制BMP-2表达，从而间接抑制成骨分化，促进成脂分化。第三促进骨细胞凋亡：糖皮质激素通过影响维持骨的水化、骨的血管及骨的强度而导致骨细胞的凋亡。实验证明，长期使用糖皮质激素诱导骨细胞自噬的发生，抑制骨细胞的生存能力。也有报道低剂量的糖皮质激素导致骨细胞的自我吞噬，高剂量或者长时间使用糖皮质激素则导致骨细胞的凋亡。糖皮质激素还能促进破骨细胞生成及延长破骨细胞生存时间：有报道在大鼠破骨细胞培养中，糖皮质激素延长破骨细胞的平均生存时间。体外证据也表明，在大鼠糖皮质激素诱导骨质疏松性骨折模型中，尽管破骨细胞前体数目在减少，但成熟破骨细胞却仍然增加。接受糖皮质激素和双膦酸盐的大鼠，根据破骨细胞数量的维持证明了双膦酸盐对其破骨细胞凋亡的预期影响受到终止，另外，骨质密度的丢失也证明了这一点。糖皮质激素对骨组织的间接作用。

目前的糖皮质激素致骨质疏松模型，由于未采用最佳条件，导致模型成功率低，有的方法并不能稳定的建立骨质疏松模型，有的方法动物死亡率太高，导致现有模型不适合大规模抗骨质疏松模型的筛选，所以探究一种稳定的骨质疏松模型建立方法，用以大规模筛选抗骨质疏松药物。

发明内容

本发明的目的是由下述技术方案来实现的：

SD大鼠，由沈阳药科大学动物室提供，鼠龄2-3个月，体重250-300g,随机分组后置于温度20-24℃,恒湿(55±5％)，12小时光照(08:00--20:00),12小时黑暗,隔音的动物室内，自由摄食，饮水，适应上述环境一周后用于实验。