[发明专利]一种褐纹报春苣苔的离体培养方法

说明书

本发明公开了一种褐纹报春苣苔的离体培养方法，包含如下步骤：步骤一、春季取褐纹报春苣苔的幼嫩叶片，清洗、消毒后将处理后的叶片接入初代培养基上，培养14d；步骤二、将步骤一培养后的无菌叶片切片，接入不定芽诱导培养基中，培养15‑18d；步骤三、将步骤二获得的不定芽转接到继代培养基中培养25‑30d；步骤四、将步骤三获得的组培小苗转接于生根培养基中培养18‑20d；步骤五、将步骤四获得的生根苗炼苗4‑5d，栽到基质中，培养7‑10d。本发明的褐纹报春苣苔的离体培养方法操作简单，设计合理，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，能保持原有品种的优良性状，不受季节的限制的优点。

技术领域

本发明涉及一种褐纹报春苣苔的离体培养方法。

背景技术

褐纹报春苣苔(Primulina glandaceistriata(Gesneriaceae))是苦苣苔科报春苣苔属的多年生草本植物。本种于2014年发表在《Phytotaxa》上，主要分布于广西灵川县。该种在形态上和Primulina dryas和Primulina beiliuensis较近，但其叶片具备棕色条纹而又显著区别于这两个种。该物种目前属于极危物种。

作为一个极危物种，目前褐纹报春苣苔的研究仍处于空白阶段，面临的形势较严峻。目前需要一种繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，能保持原有品种的优良性状，不受季节的限制的褐纹报春苣苔的离体培养方法。

发明内容

基于以上现有技术的不足，本发明所解决的技术问题在于提供一种繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，能保持原有品种的优良性状，不受季节的限制的褐纹报春苣苔的离体培养方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种褐纹报春苣苔的离体培养方法，包含如下步骤：

步骤一、外植体的消毒灭菌，春季取褐纹报春苣苔的幼嫩叶片，清洗、消毒然后切去少量叶片的边缘，然后将处理后的叶片接入初代培养基上，培养14d；

步骤二、不定芽的诱导，将步骤一培养后的无菌叶片切成1cm×1cm大小，并将叶片的边缘切去少量，接入不定芽诱导培养基中，培养15-18d，形成不定芽；

步骤三、继代培养，将步骤二获得的不定芽转接到继代培养基中培养25-30d，形成组培小苗；

步骤四、生根培养，将步骤三获得的组培小苗转接于生根培养基中培养18-20d，获得生根苗；

步骤五、炼苗移栽，将步骤四获得的生根苗移出培养室后揭盖在自然条件下炼苗4-5d，然后洗净培养基移栽到基质中；浇透定根水后，将移栽小苗置于有遮阳网的荫棚下，早晚浇水一次，培养7-10d。

作为上述技术方案的优选实施方式，本发明实施例提供的褐纹报春苣苔的离体培养方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：

作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，所述步骤一为，春季取褐纹报春苣苔的幼嫩叶片，用中性洗涤剂浸泡40～60min后在流水下冲洗30min，并用软毛刷轻轻刷洗；在超净工作台上，先用棉球蘸取75％酒精拭擦叶片表面，无菌水冲洗2次，再将叶片在75％酒精中浸泡10s，无菌水冲洗3次；用0.1％升汞浸泡叶片10min，无菌水冲洗3次，并轻轻震荡使叶片充分接触升汞；将叶片的边缘切去少量然后接入初代培养基MS培养基上，培养14d。

作为上述技术方案的改进，在本发明的一个实施例中，所述步骤二中的不定芽诱导培养基为MS+TDZ1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L+卡拉胶6.0g/L，并调节pH6.4。