[发明专利]一种展示VEGFR-2的重组T4噬菌体的制备方法

说明书

本发明属于医药工程技术领域，具体涉及一种能在表面展示VEGFR‑2蛋白的重组T4噬菌体的制备方法。首先构建携带有VEGFR‑2胞外区片段的重组质粒，然后转化大肠杆菌BL21，同时利用溶菌酶缺陷型噬菌体T4 e^‑侵染大肠杆菌BL21，使T4 e^‑噬菌体发生同源重组，最终获得表面展示VEGFR‑2蛋白的重组T4噬菌体。初步试验表明，所获得的重组T4噬菌体保持了较好的生物活性，具有与VEGF结合并且抑制其功能的生物活性，可以用于治疗包括肿瘤在内的多种与血管增生有关的疾病。该重组噬菌体能够阻止VEGF与VEGFR‑2的结合，具有显著的抗肿瘤血管生成活性，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于医药工程技术领域，具体涉及一种能在表面展示VEGFR-2 蛋白的重组T4噬菌体的制备方法。

背景技术

恶性肿瘤的生长、侵袭和转移依赖于血管生成。血管生成主要取决于促血管生成因子和抑制血管生成因子之间的平衡与失衡，肿瘤细胞产生促血管生成因子增多和 (或)抑制血管生成因子的减少均可以启动肿瘤血管生成过程。目前，已经有超过20 个促血管生成因子和 300 个抑制血管生成因子被发现。促血管生成因子主要包括：血管内皮生长因子(VEGF) 、血小板衍生生长因子 (PDGF) 、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 、转化生长因子 (TGF) 、胰岛素样生长因子 (IGF) 和表皮生长因子 (EGF) 等，而抑制因子主要有血管抑制素 (Angiostatin) 、内皮抑素 (Endostatin) 、凝血栓蛋白-1 (TSP-1) 、血小板因子-4 (PF-4)、基质金属蛋白酶 (MMPs) 抑制剂、生长抑素 (Somatostatin) 等。

VEGF是最重要的促血管生成因子，目前发现的 VEGF家族包括六大成员，即VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子(PLGF)，都是二聚体糖蛋白。其中，VEGF-A 主要影响血管的生成，它是发现最早、研究最深入的 VEGF 家族成员，而 VEGF-C 和VEGF-D 与淋巴管的形成关系更加密切。许多肿瘤组织和肿瘤细胞株均高表达VEGF，既能通过旁分泌作用于肿瘤血管内皮细胞，促进血管生成，同时又能通过自分泌刺激肿瘤细胞的增殖，从而促进肿瘤的生长、侵袭和转移。VEGF的生物活性主要通过 VEGF 受体 (VEGFR，Vascular Endothelial Growth Factor Receptor，血管内皮细胞生长因子受体) 介导，目前已发现 3 种 VEGF 受体：VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。其中，VEGFR-3 在淋巴系统中表达，而 VEGFR-1 和 VEGFR-2 则位于血管内皮细胞上，均属于酪氨酸激酶III型受体，都有7 个免疫球蛋白样胞外区、跨膜区和一个含酪氨酸激酶的细胞内功能区。人的 VEGFR-2 又名激酶插入区受体 (KDR)，是 VEGF 的主要功能受体。 由于VEGF/VEGFR-2 信号通路在肿瘤血管生成过程中起关键作用，因此阻断该信号通路的策略可以被用于抗肿瘤血管生成。目前主要包括 VEGF 或 VEGFR-2 的单克隆抗体、可溶性 VEGFR-2 受体和小分子酪氨酸激酶抑制剂等。贝伐珠单抗 (Bevacizumab) 是人源化的 VEGF 单克隆抗体，2004 年2月获美国食品药品管理局(FDA)批准用于结直肠癌的治疗。雷莫罗单抗 (Ramucirumab) 是完全人源化的 VEGFR-2 单克隆抗体，2014年4月获 FDA批准用于治疗进展期胃癌或胃食管连接部腺癌。