[发明专利]小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法

权利要求书

1.一种小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)小鼠或人类早期胚胎的准备

材料来源是3-8天的小鼠早期胚胎或来源于体外受精3-14天的人类早期胚胎；

2)ASCs过渡型干细胞诱导建系

将步骤1)中获得小鼠胚胎或者人类早期胚胎在KSOM培养液体外培养2天后，通过用台氏酸去掉胚胎的透明带，然后把裸露的胚胎在不使用血清替代物和饲养层细胞的条件下，在N2B27基础培养液中添加碱性纤维母细胞生长因子bFGF、激活素A的AF培养液中进行干细胞诱导建系处理；

500ml ASCs干细胞诱导建系的AF培养液组成：

获得的干细胞称为ASCs过渡型干细胞；

3)quteASCs多能性干细胞诱导传代

把获得的ASCs过渡型干细胞通过Wnt基因、BMP4基因干细胞信号通路调控，进一步诱导培养获得多能性干细胞quteASCs；具体方法为：首先，在不使用血清替代物和饲养层细胞的条件下，在N2B27基础培养液中添加激活素A、BMP4、CHIR99021和LIF的ABCL培养液进行干细胞诱导，培养10-14天后ASCs细胞中开始出现绿色标记细胞GOF-GFP，把绿色细胞克隆挑出传代或者继续培养形成细胞杂合体，通过流式细胞仪把绿色细胞分离纯化，在同样条件下进行干细胞培养增殖传代2-3天，用细胞消化液消化后采用同样培养液和方法继续传代20代以上；

500ml quteASCs多能性干细胞诱导的ABCL培养液组成：

2.根据权利要求1所述的小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法，其特征在于，所述步骤1)中，3-8天的小鼠早期胚胎来源于体外受精或者从母体子宫回收。