[发明专利]一种基因组编辑载体、其组成的基因组编辑系统及应用有效
| 申请号： | 201611103233.X | 申请日： | 2016-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN108148853B | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 田朝光;刘倩;高染染;李金根;孙文良;林良才;高婧芳 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/113;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;侯桂丽 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因组 编辑 载体 组成 系统 应用 | ||
1.一种基因组编辑载体，其特征在于，所述基因组编辑载体包括启动sgRNA的编码DNA转录的启动子，所述启动子为RNA聚合酶III型启动子U6；
所述基因组编辑载体还包括所述RNA聚合酶III型启动子U6调控的sgRNA转录的表达框；
所述基因组编辑载体还包括Cas9蛋白的表达框；
所述RNA聚合酶III型启动子U6的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的编辑载体，其特征在于，所述RNA聚合酶III型启动子为嗜热毁丝霉RNA聚合酶III型启动子U6。
3.根据权利要求1所述的编辑载体，其特征在于，所述sgRNA转录的表达框为U6p-amdS-sgRNA、U6p-cre1-sgRNA、U6p-res1-sgRNA、U6p-gh1-1-sgRNA或U6p-alp1-sgRNA中的任意一种或至少两种的组合；
所述U6p-amdS-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述U6p-cre1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述U6p-res1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述U6p-gh1-1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
所述U6p-alp1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
4.根据权利要求1所述的编辑载体，其特征在于，所述Cas9蛋白的表达框包括Ptef1启动子、Ptef1启动子调控的Cas9蛋白和TrprC终止子。
5.根据权利要求4所述的编辑载体，其特征在于，所述Ptef1启动子为嗜热毁丝霉翻译延伸因子TEF1A的启动子。
6.根据权利要求4所述的编辑载体，其特征在于，所述Ptef1启动子的核苷酸序列如SEQID NO.7所示。
7.根据权利要求4所述的编辑载体，其特征在于，所述Cas9蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.8所示，所述Cas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
8.根据权利要求4所述的编辑载体，其特征在于，所述Cas9蛋白的表达框还包括绿色荧光标记蛋白。
9.根据权利要求4所述的编辑载体，其特征在于，所述Cas9蛋白的表达框的核苷酸序列如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。
10.一种基因组编辑的系统，其特征在于，所述系统包括如权利要求1-9中任一项所述的基因组编辑载体。
11.根据权利要求10所述的系统，其特征在于，所述系统还包括和同源供体DNA序列。
12.根据权利要求11所述的系统，其特征在于，所述同源供体DNA序列包括donor-cre1、donor-res1、donor-gh1-1或donor-alp1中的任意一种或至少两种的组合；
所述donor-cre1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
所述donor-res1的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；
所述donor-gh1-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
所述donor-alp1的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
13.一种宿主细胞，其特征在于，包含有如权利要求1-9中任一项所述的基因组编辑的载体或如权利要求10-12任一项所述的基因组编辑的系统。
14.根据权利要求13所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为真菌细胞。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院天津工业生物技术研究所，未经中国科学院天津工业生物技术研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201611103233.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
