[发明专利]一种茶叶籽酚类化合物的定性方法

权利要求书

1.一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法鉴定；所述鉴定包括以下步骤：

样品前处理：称取茶叶籽粉置于锥形瓶中，加入提取液摇匀、震荡提取、离心，收集上层澄清液，沉淀物重复提取，合并上清液旋蒸浓缩至干后得到提取物，提取物用有机溶液溶解得到溶解液，溶解液经有机膜过滤，密封冷藏得到待分析液；

离子色谱图的获得：设置相应的液相色谱条件和质谱条件，通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法对前处理中获得的待分析液进行检测，得到总离子流色谱图及提取特征离子色谱图；色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18，100mm×2.1mm，1.8μm；质谱条件为：

一级质谱，采用鞘流电喷雾双喷源，在负离子扫描方式下进行数据采集，参比离子m/z为112.9855和980.0163，干燥气为高纯N₂，毛细管电压4000V，雾化气压力30psig，碎裂电压140V，干燥气温度190℃，干燥气流速9L/min，鞘气温度350℃，鞘气流速10L/min，离子扫描范围m/z 100～1100；

二级质谱，碰撞能量设定为10～40eV；

茶叶籽提取物化学成分的初步鉴定：分析检测所获得的总离子流色谱图及提取特征离子色谱图，计算该特征离子对应的未知化合物的元素组成和精确分子量，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定；

诱导裂解：选择离子丰度>10⁶cps的分子离子峰对未知化合物进行碰撞诱导裂解，通过裂解所得的二级质谱得到未知化合物相应的碎片离子；

茶叶籽提取物化学成分判断：根据未知化合物的裂解情况和裂解所得的碎片离子推断提取物中酚类化合物种类。

2.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的提取液为乙醇水溶液。

3.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的提取液为50％乙醇水溶液v/v。

4.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的提取物用有机溶液为甲醇水溶液。

5.权利要求4所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的提取物用有机溶液为50％甲醇水溶液v/v。

6.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的震荡提取为60℃振荡提取1h。

7.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的离心为转速4000rpm离心10min，旋蒸浓缩为在35℃下旋蒸浓缩至干。

8.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理为：准确称取茶叶籽粉于锥形瓶中，加入20-30倍茶叶籽粉重量体积比50％乙醇水溶液v/v摇匀，于60℃下振荡提取1h后，在4000rpm转速下离心10min，收集上层澄清液，继续向剩余沉淀物中加入8-10倍茶叶籽粉重量体积比50％乙醇水溶液v/v清洗，离心收集上清液，重复提取1-3次，合并上清液于35℃下旋蒸浓缩至干后，用50％甲醇水溶液v/v定容至0.25倍茶叶籽粉重量体积比溶解液，溶解液经0.2μm有机滤膜过滤得到待分析液，密封冷藏待分析。

9.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述色谱图的获得步骤中的液相色谱条件为：

流动相：A为0.1％甲酸水溶液v/v，B为0.1％甲酸乙腈溶液v/v；

梯度洗脱：0-5min：5％-10％B，5-7min：10％-20％B，7-9min：20％B，9-10min：20％-50％B，10-12min：50％B，12-13min：50％-5％B，13-15min：5％B；以上百分含量均为体积比；

流速0.4mL/min；柱温30℃；进样量2.0μL；平衡时间3min。

10.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述茶叶籽提取物化学成分的初步鉴定为，首先提取总离子流色谱图中主要色谱峰对应的特征质谱离子，通过Qualitative Analysis离线分析软件提取该特征质谱离子对应的色谱图，通过Q-TOF定性软件计算该特征质谱离子对应的化合物的元素组成和精确分子量，通过查阅参考文献汇总山茶属植物酚类化合物的基础信息，将未知化合物的元素组成与山茶属植物酚类化合物的基础信息进行比对，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定。