[发明专利]用于检测番茄晚疫病菌的LAMP引物组合物和应用

权利要求书

1. 用于检测番茄晚疫病菌的LAMP引物组合物，其特征在于，所述引物组合物由4条特异性引物组成，包括1对外侧引物F3/B3和1对内侧引物FIP/BIP，F3/B3和FIP/BIP引物序列如下：F3: 5’-GCCGATGAGGTCATGTGC-3’，B3: 5’-GTTCACGGCCAGCTTACG-3’，FIP: 5’-AGTGGGGGTGGTGAGCTTCACTG- GACAATGAGGCCCTGTA-3’，BIP: 5’-GGTGACCTGAACCACTTGGTGTGTTC- AGCTGACCGGGGAA- 3’。

2.一种番茄晚疫病菌LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测样品基因组DNA；

（2）LAMP反应体系的建立：以步骤（1）提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的外侧引物F3/B3和内侧引物FIP/BIP进行LAMP扩增，LAMP检测反应体系为25 μL，包括5 μM外侧引物F3和B3各1.0 μL，40 μM内侧引物FIP和BIP各1.0 μL，LAMP反应混合液12.5μL，8 U Bst聚合酶1.0 μL，DNA模板1.0 μL，用灭菌超纯水补足至25μL；

（3）LAMP反应条件：64 ℃温育60 min；

（4）反应结果的测定：采用荧光染料目测观察法进行测定，待LAMP反应结束后，在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR greenⅠ1.0 μL，显色结果观察到绿色荧光的判断为阳性，存在番茄晚疫病菌，橙色或橘黄色判断为阴性，不存在番茄晚疫病菌。

3. 根据权利要求2所述的一种番茄晚疫病菌LAMP检测方法，其特征在于，步骤（2）所述的LAMP反应混合液由以下组分组成：40 mM Tris-HCl，20 mM (NH₄)₂SO₄，20 mM KCl，16 mMMgSO₄，1.6 mol/L甜菜碱，2.0 mM dNTPs，0.2wt.% Trion X-100。

4.如权利要求1所述的引物组合物在番茄晚疫病的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。