[发明专利]一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒，旨在解决现有技术中T3免疫测定试剂的特异性和灵敏度方面都比较差的问题。一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒，包括羊单抗包被的磁珠、ANS解离剂和酶工作液；羊单抗包被的磁珠上标记有生物素。本发明采中包含羊单抗包被的磁珠，磁微粒(磁珠)上包被的是生物素的抗体，抗体为羊的单克隆抗体，试剂盒的特异性和灵敏度都比之前的T3免疫测定试剂高。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其涉及一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒。

背景技术

三碘甲状腺原氨酸(T3)属于小分子项目，现有T3免疫测定试剂的抗体一般为多克隆抗体或鼠的单克隆抗体，在特异性和灵敏度方面都有所欠缺。现有技术没有稀释待标记抗体至固定浓度，标记微量抗体时操作不方便，同时批间差异大，不同批次的试剂盒功能差距较大，造成稳定性较低。

发明内容

本发明提供了一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒，旨在解决现有技术中T3免疫测定试剂的特异性和灵敏度方面都比较差的问题。

为了解决以上技术问题，本发明通过以下技术方案实现：一种用于测定三碘甲状腺原氨酸的试剂盒，包括羊单抗包被的磁珠、ANS解离剂和酶工作液；羊单抗包被的磁珠上标记有生物素。ANS解离剂为含ANS的解离剂(ANS：8-苯胺-1-萘磺酸8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid)。

进一步，所述羊单抗包被的磁珠的制备方法为：将羊单抗稀释到设定的浓度，对稀释后的羊单抗进行生物素标记获得生物素抗体，将生物素抗体包被在裸磁珠上获得羊单抗包被的磁珠；所述设定的浓度为固定值。

在对羊单抗标记之前，将羊单抗稀释到特定的浓度，可以提高试剂盒的稳定性，不同批次的试剂盒功能相近。

进一步，设定的浓度在0.1mg/mL～0.6mg/mL内取值。

羊单抗稀释到特定的浓度在该范围内时，试剂盒的效价较高，而且稳定性好。

进一步，所述羊单抗包被的磁珠的制备方法为：

A、采用PBS缓冲液对羊单抗透析，取出透析完毕后的羊单抗；将透析完毕后取出的羊单抗稀释到设定的浓度；

B、将BNHS溶于DMSO中，配置成BNHS溶液；其中BNHS(N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯；EZ-Link NHS-LC-Biotin，50mg，厂家：Thermo Prod#21336)；

C、将稀释后的羊单抗和BNHS溶液混合并反应，反应设定时间后，加入Tris缓冲液终止反应，获得生物素抗体；

E、采用PBS缓冲液对生物素抗体进行透析；

F、取出透析后的生物素抗体，生物素抗体包被裸磁珠，获得羊单抗包被的磁珠。

进一步，所述羊单抗包被的磁珠的制备方法为：

A、采用0.1～0.3mol/L的PBS缓冲液对的羊单抗透析，透析的温度为2～8℃；取出透析析完毕后的羊单抗，将羊单抗稀释到设定的浓度；

B、将BNHS溶于DMSO中，配置成8～12mmol/L的BNHS溶液；

C、将步骤A解析后的羊单抗和步骤B配制的BNHS溶液混合并反应28～33分钟；

D、用0.8～1.2mol/L的Tris缓冲液终止步骤C的反应；获得生物素抗体；

E、采用浓度为0.1～0.3mol/L的PBS缓冲液对生物素抗体进行透析，透析的温度为2～8℃；

F、向透析后的生物素抗体加入丙三醇，生物素抗体与丙三醇体积比为4:5～5:4；