[发明专利]一种人ZNF295多肽及其抗体制备方法

说明书

本发明公开了一种N端特异的人ZNF295多肽以及抗体的制备方法，属于以抗体为特征的体外实验用的生物制品。N端特异的人ZNF295多肽的氨基酸序列为：QSLFTNKENESQTV。抗入ZNF295多肽抗体按以下方法制备：(1)人ZNF295抗原表位分析；(2)人ZNF295 N端多肽合成；(3)合成多肽与载体蛋白交联；(4)制备兔抗人ZNF295多肽抗体；(5)收集、分离得到含有抗体的血清，纯化抗体，即得到抗人ZNF295多肽抗体。本发明制备的N端特异的抗人ZNF295合成多肽抗体效价高、亲和力强、特异性好，可与天然人ZNF295发生特异性结合反应；制备成本低；纯化后的抗体可以用于免疫印迹和免疫组化。该抗体为ZNF295蛋白的基础研究，比如对ZNF295的特性、功能、表达谱和含量的分析，及其相关疾病的研究提供了一个重要的工具。

1.技术领域

本发明涉及一种多肽及其抗体制备方法，这种抗体主要用于天然蛋白抗原的检测。

2.背景技术

1)ZNF295功能：Down综合症(Down Syndrome)，又称21-三体综合症(21 trisomysyndrome)或先天愚型，是一种最常见的临床遗传代谢性疾病，在活产婴儿中的发病率为0.12-0.16％。细胞遗传学特征为第21号染色体呈三体征，其发生主要是由于生殖细胞在减速分裂形成配子时，或受精卵在有丝分裂时21号染色体发生不分离，使胚胎体细胞内存在一条额外的21号染色体。初步研究发现，ZNF295蛋白的过度表达被认为与这条额外的21号染色体有关，因此，对ZNF295蛋白的深入研究，对该病的发病机理，临床分型，精准治疗及预防有着重要的推动作用。(Gene.2013 Jan；10：125(2)-25)。

2)ZNF295抗体产品信息：经检索，市场上有ZNF294蛋白的多克隆抗体，但是这些抗体的抗原表位跟我公司的抗原表位不同。

3)ZNF295抗体的应用：初步研究发现，ZNF295蛋白在Down综合症中的过度表达是这条额外21号染色体的作用结果。这就提示我们，该蛋白有可能在该病的发生，发展过程中，起着重要的作用，不久将来很可能成为一个潜在的具有基础研究和临床应用价值的疾病标志物，因此，研发与其靶蛋白对应的多肽及其特异性抗体，将对研究该蛋白及其在该病发生，发展过程中的作用，及临床精准治疗及预防，提供精确可靠的工具和材料，具有重要意义。

3.发明内容

本发明提供了一种ZNF295多肽，其序列为：QSLFTNKENESQTV。用此多肽制备的抗ZNF295抗体可以在免疫印迹(Western blot)分析中特异识别组织或细胞中的天然ZNF295蛋白。

抗ZNF295抗体是通过以下步骤获得的：

步骤一：多肽序列的分析和设计：利用DNAstar软件对ZNF295蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估亲水性，抗原性，表面可能性，柔性区等指数，再结合过去制备抗体的实际经验，最终确定ZNF295蛋白56-69位14个氨基酸作为合成多肽氨基酸序列，序列为QSLFTNKENESQTV。

步骤二：多肽合成和交联：采用ACT396全自动多通道多肽合成仪合成目的多肽，并采用质谱进行鉴定；为增强多肽的抗原性，将ZNF295多肽与载体蛋白KLH采用Sulfo-SMCC交联法进行交联。

步骤三：多肽免疫和抗血清制备：将交联后的ZNF295-KLH与弗氏佐剂混合乳化，在新西兰兔背部进行皮内注射免疫，并反复加强免疫，至取血检测抗体效价达到标准时停止免疫。

步骤四：抗体纯化：实验兔抗体效价达到标准后，采用心脏取血，分离抗血清，采用Protein A纯化全抗体后，进一步采用肽亲和纯化，得到目标抗体。

抗ZNF294抗体是通过以下步骤鉴定的：