[发明专利]一种微藻及微藻的培养方法

说明书

本发明涉及生物领域，特别涉及一种微藻及微藻的培养方法，该微藻采用尼罗红染色法测定得微藻的单位细胞荧光强度为5.16×10⁴～6.54×10⁴a.u·cells^‑1；提供的微藻的培养方法，包括将待培养微藻在培养基中初步培养后，再添加壳寡糖、可溶性锌盐及2‑羟基膦酰基乙酸培养得上述微藻，能提高生物量和快速积累中性脂，具有操作方便、实用性强、培养周期短、对水体无污染、降低产业化成本等优点。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别涉及一种微藻及微藻的培养方法。

背景技术

在化石能源日益枯竭，全球气候变暖的背景下，开展节能减排，发展循环经济，开发可再生能源，是今后科技与社会发展的重要方向。国内外许多研究者早已将目光投向了开发可替代化石能源的环境友好可再生能源，生物质能源是重要的可再生能源。微藻由于具有细胞增殖快、培养周期短、生物质产量高等优点，被认为是一种极具潜力的生物能源原料。

为了提高微藻细胞中的油脂含量，通常采用两步法进行培养：第一步利用微藻增殖培养的最优化条件，获得微藻细胞的最大生物量；第二步采用营养限制、压力环境、高光强、低温培养等条件，促进微藻中性脂的积累。专利公布号CN103352006A的发明专利“一种促进自养微藻中性脂累积的培养方法”就公开了在获得细胞增殖培养至最大生物量的前提下，通过对藻液的降温以及光照条件的改变，实现了促进和提高中性脂累积的目的，单位细胞的中性脂累积量比对照最大提高40％，但是此专利操作复杂、诱导培养时间较长，增加了培养成本。专利公布号CN103484372A的发明专利“一种提高微藻生物质和油脂产量的培养方法”采用富营养和贫营养二阶段式培养的方法，实现了生物质和油脂产量的双增长，但是中间过程中采用离心浓缩的方法，增加了能耗。上述两段式培养方法进行微藻培养及油脂累积，具有培养周期较长、培养效率低、操作步骤繁琐、应用成本较高且微藻生长量低、中性脂含量不高等问题，无法进行商业应用。

发明内容

本发明旨在克服现有技术中微藻的培养及油脂累积周期长、效率低、操作繁琐、应用成本高且获得的微藻中性脂含量不高等问题，提供一种具有高油脂含量的微藻，以及简单易行、适合于大规模培养应用、高效积累中性脂的微藻的培养方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种微藻，该微藻采用尼罗红染色法测定得微藻的单位细胞荧光强度为5.16×10⁴～6.54×10⁴a.u·cells^-1。

其中，尼罗红染色法是指：采用酶标仪检测荧光强度，激发波长为480nm，发射波长为580nm。用海水将微藻样品稀释至细胞密度为1.0×10⁶cells·mL^-1左右，加入尼罗红染料使其终质量浓度为1.00μg·mL^-1，加入DMSO(二甲基亚砜)使其终体积分数为2.0％，避光染色10min，此时测定的荧光强度为总荧光强度，总荧光强度减去微藻细胞自身荧光和海水自荧光即为微藻的尼罗红荧光强度。

中性脂含量即荧光强度，

一些实施例中，微藻为等鞭金藻、三角褐指藻或威氏海链藻中的一种或几种。

本发明同时还提供了一种微藻的培养方法，包括将待培养微藻在培养基中初步培养后，再添加壳寡糖、可溶性锌盐及2-羟基膦酰基乙酸培养得上述微藻。

一些实施例中，相对于培养基的体积，所述壳寡糖的质量为0.2-1mg·L^-1；所述可溶性锌盐中锌的摩尔质量为0.05-0.1mmol·L^-1；所述2-羟基膦酰基乙酸的摩尔质量为0.12-0.2mmol·L^-1。