[发明专利]一种用于微小亚历山大藻的培养基及其培养方法

权利要求书

1.一种采用培养基培养微小亚历山大藻(Alexandrium minutum )的培养方法，其特征在于，所述培养基具体包括以下摩尔浓度的各组分：硝酸钠为1766μmol/L，磷酸二氢钠为18.15μmol/L，氯化铁为5μmol/L，Na₂EDTA为5μmol/L，硫酸铜为0.02μmol/L，钼酸钠为0.015μmol/L，硫酸锌为0.04μmol/L，氯化钴为0.025μmol/L，氯化锰为0.45μmol/L，硝酸钐0.01μmol/L，天然海水；所述天然海水的盐度通过添加氯化钠或纯水将盐度调节至24‰；

具体包括以下步骤：

(1)将处于对数生长期藻种接种于上述培养基中，调节初始密度为5000±200cell/ml，温度为25℃，光照为125±12.5μmol/(m²·s)，昼夜光照时间比为12h∶12h条件下静置培养8-9天；

(2)在其中加入等体积上述新制的培养基，进行扩大培养，培养4-5天；

(3)重复步骤(2)的培养过程，使培养液的体积不断增加；

(4)在一个步骤(2)的重复过程完成后，将培养器中的藻液取出部分，置于温度20℃，光照125±12.5μmol/(m²·s)，昼夜光照时间比为12h∶12h条件下静置培养，在3～5天后即可收获藻细胞，同时，向培养器中补充剩余藻液的等体积新制的培养基，与培养器中剩余的藻液混合，重复步骤(2)的培养过程；

(5)不断重复步骤(2)及步骤(4)，获取到高毒素含量的微小亚历山大藻。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，该培养基的配制方法具体如下：

(1)天然海水静置，取上清海水经0.22μm滤膜过滤，装在透明培养容器中，121℃高压蒸汽灭菌20分钟，所述天然海水的盐度通过添加氯化钠或纯水将盐度调节至24‰；

(2)将各组分首先配制成储备液，硝酸钠储备液浓度为1766mmol/L，磷酸二氢钠储备液浓度为18.15mmol/L，微量金属元素储备液含氯化铁5mmol/L，Na₂EDTA5mmol/L，硫酸铜0.02mmol/L，钼酸钠0.015mmol/L，硫酸锌0.04mmol/L，氯化钴0.025mmol/L，氯化锰0.45mmol/L，硝酸钐0.01μmol/L，将储备液也在121℃高压蒸汽灭菌20分钟；

(3)在紫外灭菌30分钟后的超净工作台或培养室中，将1毫升硝酸钠储备液、1毫升磷酸二氢钠储备液、1毫升微量金属元素储备液加入到灭菌海水中，定容至1L，使其配制成配方中规定的浓度，培养基即完成配制。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)中，向取出来的藻液中添加硝酸钠，添加量为每升藻液1766μmol。