[发明专利]一种甘蓝型油菜CMS恢复系的快速批量选育方法

权利要求书

1.一种快速批量选育CMS恢复系的育种方法，其特征在于，该方法所构建的聚合亲本包含有众多适于不同生态区域的优良性状基因；借助化学诱导雄性不育技术，进行4个世代的轮回，各优良品种进行了充分的互交，众多优良性状基因进行了充分的聚合重组，从而产生了一个新的拥有众多优良性状基因的聚合群体；通过小孢子培养获得的DH分离群体，放在4个不同生态区进行性状选择和基因型鉴定，最终选育出一批分别适于各自生态区域的优良CMS恢复系。

2.如权利要求1所述的快速批量选育CMS恢复系的育种方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)以长江上、中、下游和黄淮区国审的18个甘蓝型油菜CMS三系杂交品种等量混合做为聚合亲本；

2)当年秋播，把聚合亲本按1:2行比种植在隔离网室，行比1的做父本，行比2的做母本；

3)在蕾苔期，利用化学杂交剂“SX-1”诱导母本产生雄性不育；

4)在油菜花期，通过人工辅助授粉，使母本充分授粉结实，成熟时仅收取母本种子，做为下一个轮回的亲本；

5)重复步骤2)到步骤4)，直至进行4个世代的轮回；

6)把经过4个世代轮回产生的聚合群体秋季播种，第2年花期，选用该群体正常可育植株主花序和上部分枝上长度3.5-4.0mm的花蕾，以0.5mmol/L的秋水仙碱加倍染色体48小时，通过小孢子培养获得双单倍体分离群体。

7)把该DH分离群体中正常可育的株系分别种植在4个不同生态区，依据该生态区的育种目标进行表现型选择，同时和CMS不育系测交进行基因型鉴定，最终选育出一批分别适应长江上、中、下游和黄淮区的优良CMS恢复系。

3.如权利要求2所述的快速批量选育CMS恢复系的育种方法，其特征在于，18个CMS三系杂交种等量混合构成的聚合亲本，其基因型为S(R,r)，经过4个世代聚合重组产生新的聚合群体；花期取聚合群体正常植株的花蕾经小孢子培养获得的DH分离群体，不育株系直接淘汰；正常株系分别种植在4个生态区，依据各生态区育种目标进行表现型选择符合育种目标的优良株系与CMS不育系进行测交。

4.如权利要求2所述的快速批量选育CMS恢复系的育种方法，其特征在于，利用化学杂交剂“SX-1”诱导母本产生雄性不育，要求如下：

1)在油菜蕾苔期，母本苔高20cm，主花序最大花蕾长2mm左右时，利用化学杂交剂“SX-1”涂抹油菜茎干，诱导母本产生雄性不育；在蕾苔期，对母本行满足要求的植株逐个进行涂茎处理；

2)涂茎诱导方法：吸取“SX-1”原液用食用油配成浓度为5.5-6.5mg/L的药液，用毛笔涂抹在油菜茎干上，涂抹位置距离地面10cm左右，涂抹长度5cm左右。

5.如权利要求2所述的快速批量选育CMS恢复系的育种方法，其特征在于，油菜小孢子培养方法：

1)油菜小孢子的分离提取

在油菜初花一周内，取聚合群体正常可育植株主花序和上部分枝花序上长度为3.5-4.0mm的花蕾用蒸馏水冲洗干净；在超净工作台上先用70％酒精灭菌30s，再用20％次氯酸钠灭菌15min，然后用无菌水冲洗3次；取灭菌好的花蕾放入B5培养基中研磨成匀浆；用300目双层尼龙网过滤，10ml离心管收集滤液，经800rpm离心5min，吸去上清液，加入液体B5培养基悬浮小孢子，再离心，重复3次，吸去上清液；

2)染色体加倍

在上述离心管中加入含有0.5mmol/L秋水仙碱的NLN-13培养基，悬浮小孢子，并分装于150ml三角瓶中，用灭菌的尼龙纸封口，32℃暗培养48h；

3)小孢子培养

将经过上述处理的溶液1000rpm离心5min，吸取上清液，去除秋水仙碱，并加入无激素的NLN-13培养基悬浮洗剂和离心1次，最后加入含6-BA0.05mg/L、NAA0.5mg/L的NLN-13培养基悬浮小孢子，接着将小孢子溶液分装于直径为7.5cm的无菌培养皿中，每皿7.5ml，Parafi lm封口，在32℃的水浴恒温培养箱中暗培养24h，然后转移至25℃的水浴恒温培养箱中培养；当肉眼可见胚时，将培养皿转移至摇床上，在25℃下40-60rpm暗培养7d；7d后改用较大的培养皿和含有ABA0.3mg/L的NLN-13培养基在25℃条件下40-60rpm摇床光照培养；以后用相同的培养条件每7d继代1次，直到胚发育成熟，并长出完整的子叶，分化成苗后将其转移至含有6-BA0.5mg/L的B5固体培养基上进行继代和增殖，适时移栽至大田。