[发明专利]一种褐藻寡糖单体的制备方法及褐藻寡糖

权利要求书

1.一种褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用酶解法降解褐藻或褐藻胶得到酶解液；及

将所述酶解液分离纯化得到所述褐藻寡糖单体；

所述褐藻寡糖单体包括甘露糖醛酸二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖中的一种；

采用酶解法降解褐藻或褐藻胶得到酶解液，包括下述步骤：

步骤110：将室温状态下的嗜糖芽孢杆菌YIC-Alg3接种于海水培养基中，于25-35℃温度条件培养10-24h，得到活化液；

步骤120：取适量的所述活化液接种于Alg培养基中，培养20-30h，得到发酵液；

步骤130：将所述发酵液离心处理，取上清液加入硫酸铵至所述硫酸铵的饱和度为75％-85％，静置12-24h后再恒温离心处理，获取沉淀物；

步骤140：将所述沉淀物用磷酸盐缓冲液充分溶解后，于0-4℃温度条件下离心处理，得到的上清液即为粗酶液；

步骤150：将所述粗酶液添加于褐藻浆液或褐藻胶溶液中，并于30-45℃摇床内酶解20-30h后再离心处理，取上清液，得到所述酶解液；

步骤110中，所述嗜糖芽孢杆菌YIC-Alg3的保藏单位名称为中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期为2016年03月02日，保藏号为CGMCC NO12155；

步骤110中，所述海水培养基的配方为：酵母粉5g、蛋白胨10g、海水1000ml、pH7.2-7.4；

步骤120中，所述Alg培养基的配方为：海藻酸钠5g、硫酸氨5g、硫酸镁1g、磷酸氢二钾2g、去离子水1000ml，pH 7.2-7.4；

步骤140中，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4；

步骤S150中，向褐藻浆液或褐藻胶溶液中添加的粗酶液体积分数为2.5-7.5％。

2.如权利要求1所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，将所述酶解液分离纯化得到所述褐藻寡糖单体，包括下述步骤：

步骤210：在所述酶解液加入稀盐酸，使所述酶解液沉淀出古罗糖醛酸及其聚合物；

步骤220：对上述混合物离心处理，去除古罗糖醛酸及其聚合物，并收集上清液；

步骤230：在所述上清液中，加入乙醇，使得到的混合物中醇体积分数浓度为70％-80％，沉淀、离心后取上清，再冷冻干燥，得到甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物；

步骤240：将所述甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物用纯水溶解后，上样Bio-gelP6柱，并用碳酸氢铵溶液洗脱，收集第一洗脱液；

步骤250：将所述第一洗脱液上样Bio-gel P6柱，以碳酸氢铵溶液洗脱，收集第二洗脱液得到所述褐藻寡糖单体。

3.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，在完成步骤240之后，进行步骤250之前，还包括下述步骤：

选取所述第一洗脱液中TLC检测后寡糖组分相同的样本，汇集，浓缩。

4.如权利要求2所述的褐藻寡糖单体的制备方法，其特征在于，步骤250中，所述碳酸氢铵溶液的浓度为0.4-0.6mol/L。

5.一种褐藻寡糖，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的褐藻寡糖单体。