[发明专利]一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及环境监测领域中，一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法。

背景技术

环境监测作为环境保护工作中不可或缺的步骤,它可以对影响环境质量的各因素进行科学的测定。其主要的监测对象是水环境、大气、土壤、固体废料、以及生态环境。常见的环境监测方法如高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、原子发射光谱仪(AES)、原子吸收光谱仪(AAS)、荧光光谱仪等。虽然这些方法具有较高的成熟度和精密度，但是这些监测仪器因为尺寸的局限，不能够进行原位实时检测，且价格昂贵，操作复杂，需要前过程处理。因此，环境监测领域急需研发快速简便、特异性强、可实时原位检测的监测方法。

核酸适体是通过SELEX技术从核酸分子文库里利用寡核苷酸严格的识别和亲合力而人工合成的，与配体高效、专一结合的DNA或RNA寡核苷酸。当靶物质存在时，核酸适体能与靶物质相互作用，发生适应性折叠。核酸适体能通过氢键、疏水堆积作用、范德华力，与插入或包被的靶分子形成稳定的空间结构，如发夹、茎环、口袋、假结、凸环、G-四聚体等特殊三维空间结构。

倏逝波光纤生物传感器是近几年发展很快的一种光学传感器。其原理主要是：一束光线以适当的角度进入光纤时，会以全反射方式在光纤中传播，产生一种横贯光纤的波，通过光纤与其它介质的交接处传出光纤，这种波随传播快速衰减，称为倏逝波。倏逝波光纤生物传感器利用这种性质，在倏逝波波导表面加上生物敏感元件(本方法中为核酸适体)，当倏逝波穿过生物敏感元件时，或产生光信号，或导致倏逝波与光纤内传播光线的强度、相位或频率改变。测量这些变化，即可获得生物敏感元件或者光纤变化的信息，即核酸适体与分析物相互作用的信息。

在核酸适体生物传感器的构建中，核酸适体的固定化是关键步骤，此步骤将直接影响传感器的性能。为了获得理想的传感界面，往往需要借助物理或化学方法将核酸探针有效地固定在一定的界面上。目前核酸适体的固定方法大致有吸附法、共价键合法、亲和素-生物素固定法、自组装法四类。吸附法是通过氢键、范德华力、离子键、配位键、疏水作用等将核酸适体固定在载体上，这种方法一般不需要化学试剂，对生物组分的活性影响较小。

赭曲霉毒素A(OTA)是曲霉属和青霉属等产毒菌株产生的一种次生有毒代谢产物，常见于于各种谷类食品、饲料及其他农副产品中。其具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性、致畸变性等多种毒性，且OTA被国际癌症研究机构(IARC)认为对人类有潜在的致癌性，对动物和人体健康有很大的潜在危害。目前急需一种快速高效、可实时原位检测赭曲霉毒素A的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测赭曲霉毒素A。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了基于核酸适体与倏逝波光纤生物传感器光纤探头之间的非特异性吸附能力的赭曲霉毒素A(OTA)的生物传感检测方法。

本发明所提供的OTA的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对OTA标准样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。

上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体的序列可为下述A1)、A2)或A3)：

A1)序列表中序列1的核苷酸序列；

A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；

A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；

和/或，所述光纤为带有功能基团的石英光纤。所述功能基团可为羟基、氨基等。

上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体带有荧光基团。所述荧光基团为Cy5.5。

上述OTA的生物传感检测方法中，所述方法可包括：利用缓冲液处理所述待测样品，得到待测液体或将所述待测样品作为待测液体；利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。

所述缓冲液由溶质和溶剂组成，所述溶剂为10mM Tris缓冲液，所述溶质及其浓度为200mM NaCl、5mM KCl和10mM CaCl₂，pH值为6。

所述10mM Tris缓冲液由水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM。所述缓冲液的pH值可使用HCl进行调节。