[发明专利]一种耐氨氮丙酸产甲烷菌系的驯化方法

权利要求书

1.一种耐氨氮丙酸产甲烷菌系的驯化方法，其特征在于，所述耐氨氮丙酸产甲烷菌系包括丙酸氧化细菌群、互营丙酸氧化菌群、乙酸裂解产甲烷菌群、氢营养型产甲烷菌群及硝化与反硝化菌群，该方法以沼气发酵液为接种物，以丙酸为碳源，以尿素或NH₄Cl为氨氮来源，通过交替提高丙酸浓度及氨氮浓度的方法来驯化沼气发酵液来获得耐氨氮丙酸产甲烷菌系，该方法包括以下步骤：在氮气和二氧化碳体积比为4:1的混合气氛中，按体积比为19:1-9:1将接种物接种到丙酸浓度为0.5g/L、氨氮浓度为0.5g/L的新鲜培养基中，放入试剂瓶中37℃进行培养，每24h置换新鲜的培养基，保持新鲜培养基中丙酸和氨氮浓度不变，20天为一个培养周期，初始周期后新鲜培养基中丙酸浓度或氨氮浓度保持不变，提高氨氮浓度或丙酸浓度，稳定培养1-2周期后，再保持氨氮浓度或丙酸浓度不变，提高丙酸浓度或氨氮浓度，并稳定培养1-2周期，如此交替提高丙酸浓度及氨氮浓度，直至氨氮浓度大于3.0g/L、丙酸浓度大于2.0g/L获得高氨氮耐受能力的丙酸产甲烷菌系；所述试剂瓶配有带两个孔的橡胶塞，其中一个孔中插有橡胶管至试剂瓶中下部作为进出料的通道，另一个孔连接收集气体的气袋；所述新鲜培养基配制方法为：在1L水中加入400mg NH₄Cl、250mg MgSO₄·6H₂O、400mg KCl、120mg CaCl₂·2H₂O、80mg(NH₄)₂HPO₄、55mg FeCl₃·6H₂O、5000mg NaHCO₃，还加入CoCl₂·6H₂O、NiCl₂·6H₂O、MnCl₂·4H₂O、CuCl₂·2H₂O、AlCl₃·6H₂O、ZnCl₂、Na₂WO₄·2H₂O、H₃BO₃、Na₂SeO₃、Ma₂MoO₄·2H₂O各0.0005mg；此外还加入碳源和氨氮，碳源和氨氮的质量跟相应的浓度对应。

2.根据权利要求1所述耐氨氮丙酸产甲烷菌系的驯化方法，其特征在于，所述交替提高丙酸浓度及氨氮浓度，丙酸浓度的提高幅度为30-50％，氨氮浓度的提高幅度为0.3-0.5g/L。

3.一种权利要求1驯化后得到的耐氨氮丙酸产甲烷菌系的应用，其特征在于，权利要求1驯化后得到的耐氨氮丙酸产甲烷菌系可长期稳定地在氨氮浓度大于3.0g/L、丙酸浓度大于2.0g/L条件下产气。

4.一种耐氨氮丙酸产甲烷系固体菌剂的制备方法，其特征在于，将权利要求1驯化后得到的耐氨氮丙酸产甲烷系的菌液经离心，弃去液体部分后置于厌氧环境下室温风干，收集固体粉末并真空密封保存得到目标产物。

5.一种液体浓缩耐氨氮丙酸产甲烷菌剂的制备方法，其特征在于，将权利要求1驯化后得到的耐氨氮丙酸产甲烷系的菌液经离心，收集全部的固体沉淀及少许上清液，利用灭菌的液体甘油封液面以隔绝空气，-20℃保存。