[发明专利]铁皮石斛蒴果/种子的长期保存方法

说明书

本发明公开了一种铁皮石斛蒴果的保存方法，将收获的铁皮石斛果实分成完整果实和开裂果实，对完整果实依次进行以下步骤：果实消毒；果实的脱水处理；脱水后蒴果进行水分含量的检测；将被滤纸包裹的果实放入装有硅胶的密封袋中，且将至少一个的密封袋放入装有硅胶的密封容器中，将整个密封容器置于‑80℃～‑20℃保存。本发明还公开了相应的开裂果实的保存方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种珍稀兰科名贵药材铁皮石斛蒴果及种子的长期保存方法。

背景技术

铁皮石斛是兰科(Orchidaceae)石斛属多年生附生兰。《中国药典》(2010版)将铁皮石斛作为单列药材品种，明确其基源植物为兰科植物铁皮石斛(Dendrobium officinaleKimura et Migo)，其干燥茎或新鲜茎药用(国家药典委员会，2010)。铁皮石斛含有多糖、芪类、生物碱、氨基酸和微量元素等多种成分，具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖和养阴生津等多种生物活性(李玲等，2011)。

目前关于铁皮石斛组织培养所采用的外植体主要是种子、茎段、根尖、幼芽、叶片等，通过上述外植体先诱导原球茎，然后生产组培苗的方式居多，占76％以上(范俊安等，1999；杜刚等，2007)，而这些原球茎的获得有80％是以种子为外植体诱导的(金银兵，2009；李荣珍，2012)。所以真正在生产上大规模使用的外植体是种子，相比其他的繁殖方式，种胚产生原球茎的增殖途径是丛芽增殖方式的数十倍，对铁皮石斛的快速繁殖具有重要意义(蒋慧萍，2009；冯耀文等，2013)。通过茎段、根尖、叶片诱导类原球茎的方式，不适合大规模的生产，类原球茎繁殖多代后，分化成苗的潜力降低。

采用种子作为外植体，从种子播种到形成可以移栽的幼苗需要6-8个月的时间。铁皮石斛果实的成熟期一般在10月下旬至11月上旬。铁皮石斛蒴果以成熟未开裂前采收最好，种子易采收及消毒，且发芽率高。若等到果实成熟开裂时采收，不仅种子难以收集与消毒，且种子发芽率降低。将果实放入4℃的冰箱中保存，保存时间也不能超过1个月，否则易发霉腐烂或降低发芽率(蒋慧萍，2009)。因此在进行工厂化生产时，如何保存果实或种子，如何根据供苗时间自主地选择种子的播种时间就显得格外重要。关于铁皮石斛种子的保存，仅见张治国等(1997)、王君晖等(1999)的干冻法保存，即通过硅胶脱水后的种子，不经过玻璃化保护剂PVS2处理，在液氮中保存24小时或1个月，种子萌发率为92％-95％，与未经冷冻的种子的萌发率一致。在石斛属的其他种类中，Renato等(2014)报道了石斛杂交种“Dong Yai”的成熟种子放入PVS2溶液中处理1-3小时，再投入液氮中保存60分钟后取出，进行种子萌发实验。结果表明种子的萌发率最高为58％，流式细胞分析表明冷冻保存的种子萌发产生的幼苗没有发生染色体的变化。

上述研究中，种子保存时间最长的为1个月，并且要使用液氮，对于一般的企业操作起来不是很方便，因此研究经济、有效的铁皮石斛果实或种子的保存方法尤为重要，这不仅对于种质资源的保存有重要意义，而且可以做到取材不受季节影响，有利于工厂化种苗的生产。

上文中涉及的参考文献如下：

1、杜刚,杨海英,朱绍林等.铁皮石斛种子诱导成苗试验.中药材,2007,30(10):1207-1208；

2、范俊安,张艳,李泉森,等.铁皮石斛种子培养试验研究.重庆中草药研究,1999,(40):48-49；

3、国家药典委员会.中华人们共和共药典.北京:中国医药科技出版社,2010；

4、冯耀文,李泽生,耿秀英,等.铁皮石斛组培苗工厂化生产技术关键问题探讨.热带农业科技,2013,36(3):30-32；

5、蒋慧萍,庾韦花,张向军,等.铁皮石斛种子胚培养的产业化研究.江苏农业科学,2009,(2):72-75；

6、金银兵.铁皮石斛的生物学特性与开花授粉技术研究.安徽农业科学,2009,37(11):5280-5282；