[发明专利]miR‑135b抑制剂在治疗骨肉瘤肺转移和复发的药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种miR-135b抑制剂在治疗骨肉瘤肺转移和复发的药物中的用途。

背景技术

骨肉瘤是致残率和致死率较高的、主要发生在10-25岁年龄段的原发性恶性骨肿瘤。上世纪80年代初，骨肉瘤患者的5年生存率已达到60％-70％，但近30年没有得到进一步提升。导致骨肉瘤治疗失败的主要原因是转移和复发。据报告，骨肉瘤患者一旦发生转移或复发其生存率仅为20-30％。肺转移是骨肉瘤转移的主要方式。在初诊患者中有20％的患者出现远处转移，其中90％为肺转移；接受正规治疗的患者中有50％的患者出现复发，其中80％为肺转移型复发，提示解决骨肉瘤肺转移和复发可以进一步提高骨肉瘤患者的5年生存率。但目前还没有方法可以有效的治疗骨肉瘤的肺转移和复发。

随着分子生物学技术的发展，人们对肿瘤的发生发展机制有了更深入的了解，并依据肿瘤发生发展中涉及的异常分子和基因，设计和研制针对特定分子和基因靶点的药物，选择性杀伤肿瘤细胞，这种方法叫肿瘤分子靶向治疗。今年来，肿瘤分子靶向治疗已经成为肿瘤治疗的发展方向，肿瘤分子靶向药物的研究和临床应用使肿瘤治疗水平提高到一个新的高度。

肿瘤干细胞是指肿瘤中具有自我更新能力并产生异质性肿瘤细胞的细胞群，导致肿瘤的耐药、转移和复发，是肿瘤靶向治疗的一个重要靶点。肿瘤干细胞由很多因素来调控；miRNA是其中一个调控因素。miRNA是指由19-22个核苷酸组成的、非编码蛋白的RNA，通过对目标基因信使RNA的降解和翻译抑制对细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程起着重要的作用。研究表明，人类基因中有1/3的基因直接收到miRNA的调控，更重要的是最近研究表明包括骨肉瘤在内的大部分肿瘤中存在miRNA的异常表达，而且异常表达的miRNA与肿瘤的发生、发展和患者的预后密切相关。更重要的是靶向此类异常表达的miRNA可以有效的抑制肿瘤的进展。

miR-135b是一种已知道的微小RNA，其相关基本信息为：Accession No：MIMAT0000758，基本序列为5`-UAUGGCUUUUCAUUCCUAUGUGA-3`。已有研究报告表明miR-135b在前列腺癌，肺癌，直肠癌，肝癌和骨肉瘤中异常表达，且起促癌的作用。然而，其对骨肉瘤的肺转移和复发中的影响还未见报道。本发明首次发现miR-135b可以作为治疗骨肉瘤肺转移和复发的靶点，miR-135b的抑制剂可用于治疗骨肉瘤。

已有大量实体瘤相关研究显示，肿瘤原发灶与转移灶之间在组织特点、蛋白质组表达、细胞生物学行为等多个方面存在较多区别。利用免疫组化和基因测序技术对骨肉瘤患者原发病灶组织与转移灶组织进行检测对比，分析发现，患者原发病灶与骨转移病灶之间的生物学信息以及基因表达具有相似性。但部分转移灶，特别是肺转移灶在组织学和基因表达上与原发病灶具有较大差异。因此在治疗时，极有可能出现对原发病灶有效，而转移病灶无效的情况，反之亦然。在JAFFE等的研究中以阿霉素、顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺(ADM，DDP，MTX，IFO)为主大剂量化疗对骨肉瘤原发疾病取得了74％的5年生存率，但在转移或复发患者中明显疗效更低。这也从侧面证明了对原发灶与转移灶的治疗需要进一步的区分、细化，才能获得最佳效果。

发明内容

本发明的目的在于解决目前骨肉瘤肺转移和复发治疗困难的问题，提供了一种miR-135b抑制剂在治疗骨肉瘤肺转移和复发的药物中的用途，所述用途以促进骨肉瘤肺转移和复发的miR-135b作为治疗靶点，利用miR-135b的抑制剂来治疗骨肉瘤肺转移和复发，其中miR-135b抑制剂包括miR-135b的antisense或antagomiR或表达miR-135b antisense的质粒。miRNA antagomiR是经过特殊化学修饰的miRNA抑制剂，与普通的miRNA抑制剂(antisense)相比，antagomiR在动物体内具有更高的稳定性，其作用时间可长达数周。

本发明利用转染阴性对照核苷酸链和miR-135b antisense的骨肉瘤肿瘤干细胞建立了负瘤动物模型，并观察了miR-135b抑制剂对肿瘤干细胞致瘤的影响。实验结果表明miR-135b抑制剂可以有效抑制肿瘤干细胞的肿瘤形成。