[发明专利]一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1及其表达方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1及其表达方法，该方法包括以下步骤：(1)从美洲大蠊组织提取RNA，反转录为cDNA；(2)合成引物：(3)以总cDNA为模板，通过PCR获得美洲大蠊胸腺素蛋白编码基因片段；(4)将编码基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；(5)采用亲和层析方法对目的蛋白进行纯化，从而获得重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1。该重组蛋白为首次通过基因工程得到，解决了胸腺素在美洲大蠊复杂的化学成分中含量极低，纯化困难的问题，为美洲大蠊胸腺素药效学功能的研究奠定基础。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体的说，涉及一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1及其表达方法。

背景技术

胸腺素(thymosin，THY)主要是由胸腺产生的一种淋巴细胞生长因子，普遍存在于各种组织细胞当中。最早是由Goldstein和White于1966年首次从胎牛胸腺蛋白提取液中发现，是一组小分子多肽，含有40多种组分，因而命名为胸腺素。根据等电点(PI)可将胸腺素分为α、β、γ3个家族，其中PI在5.0-7.0的称为β族胸腺素(β-thymosin，Tβ)，其结构高度保守，由40-44个氨基酸组成，分子质量约为5.0ku，广泛存在于脊椎动物和无脊椎动物中。β族胸腺素属于极性蛋白质分子家族，最初被认为是一种胸腺激素，具有不同程度地影响血管发生以及诱导凋亡的特性。到目前为止，已发现的β族胸腺素有15种，在人体内β族胸腺素主要有3种表现形式，即胸腺素β4、胸腺素β10和胸腺素β15。其中，胸腺素β4分布最广泛、含量最多，占β族胸腺素总量的70％-80％。他们在维持激动蛋白的动态平衡及肿瘤发病与转移，细胞凋亡，炎症，血管生成和创伤愈合等多种生理、病理过程发挥重要作用。

近年来，胸腺素的生物学功能倍受人们关注，它在许多生理和病理活动中起重要作用。然而当前关于β族胸腺素的研究主要集中在脊椎动物中。在无脊椎动物中，也发现了胸腺素的存在，但是研究的很少。昆虫THY是一个多功能分子，具有创伤修复、组织再生，在对家蚕THY的研究中发现其通过结合肌动蛋白调节昆虫的生理功能及形态结构，其序列具有高度保守性。在NCBI中只能查到18种与此蛋白相关的研究数据，主要是在果蝇、埃及伊蚊、家蚕等物种中，并且与Tβ的同源性也比较高，在牡蛎和海胆的研究中发现β族胸腺素具有抗菌能力。在无脊椎动物中，这类蛋白与Tβ4相比，它们通常具备多个THY结构域，因此又称多聚胸腺素，其结构上比脊椎动物的更为复杂，其功能有待于进一步的研究。

由美洲大蠊醇提物开发的康复新液对创面修复以及创面愈合具有非常好的效果，同时还具有消炎抗菌、增强机体免疫力等功能，这与胸腺素的研究结果极相似。我们在美洲大蠊转录组的研究中发现具有4个编码胸腺素beta-4蛋白家族功能域的转录本。然而，胸腺素在美洲大蠊复杂的化学成分中含量极低，纯化困难，因此本研究拟通过构建pET-28a(+)-THY原核表达载体，并对其原核表达产物进行纯化，获得PaTHY1蛋白质，为美洲大蠊胸腺素药效学功能的研究奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于通过基因工程提供一种美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1，并提供一种美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1的表达方法，解决胸腺素在美洲大蠊提取物中含量极低，纯化困难的问题，同时为美洲大蠊胸腺素功能的研究奠定基础。

本发明公开了一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1的氨基酸序列如SEQID No.1所示。

另一方面，本发明还公开了一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY1的表达方法，包括如下步骤：

(1)从美洲大蠊组织提取RNA，反转录为cDNA；

(2)合成引物：

Primer F CGCGAATTCATGTCGGCCCCAGTC

Primer R CCGCTCGAGTTATGCTTTCTTCTCTTCATCG