[发明专利]一种胃癌血清学检测鉴定试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种胃癌血清学检测鉴定试剂盒及方法，所述试剂盒包括cel‑miR‑39‑5p片段、引物、外泌体分离试剂、外泌体miRNA提取试剂、反转录试剂和实时荧光定量PCR试剂；所述引物为：cel‑miR‑39‑5p内参引物、hsa‑miR‑375引物、hsa‑miR‑590‑5p引物、hsa‑miR‑19b‑3p引物、hsa‑miR‑100‑5p引物和hsa‑miR‑16引物。在对患者使用血清检测胃癌CA19‑9、CA24‑2和CEA的任一结果为阳性，再使用本发明提供的检测试剂盒进行辅助检测，可以有效去除血清学检测的假阳性结果，从而避免给患者带来巨大的精神压力和财产损失；同时针对血清检测胃癌CA19‑9、CA24‑2和CEA的结果为阴性，再使用本发明提供的检测试剂盒进行辅助检测，可以有效发现血清学检测的假阴性结果，从而及时挽救患者生命。

(一)技术领域

本发明涉及一种胃癌血清检测鉴定试剂盒及检测方法。

(二)背景技术

MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其长度约为20-25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录本pri-miRNA经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。近年来的研究表明miRNA参与了多种调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和调亡、脂肪代谢等等。动物miRNAs基因通常是在核内由RNA聚合酶II(polII)转录的，最初产物为大的具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺昔酸尾巴(AAAAA)的初级转录本(pri-miRNA)。pri-miRNA在核酸酶Drosha和其辅助因子Pasha的作用下被处理成长约70个核昔酸的pre-miRNA。然后由RNA-GTP和exportin5将pre-miRNA输送到细胞质中。随后，另一种核酸酶Dicer将其剪切产生长约22个核苷酸的miRNA:miRNA*双链复合体。这种双链复合体很快被引导进入沉默复合体(RISC)中，其中一条成熟的单链miRNA保留在这一复合体中。成熟的miRNA结合到与其互补的mRNA的位点通过碱基配对进而调控基因表达。目前认为，10-30％的人类基因都受到miRNA的调控。癌症的早期诊断对其成功治愈有重要的作用。容易获得并且稳定的生物学标记能够提供一系列相关的有价值的肿瘤生物学信息。CA19-9、CA24-2和CEA是目前胃癌诊断的主要血清学指标，但是这些检测的敏感性和特异性仍不高，假阳性率较高，因为人们对癌症的恐惧心理，假阳性的检测结果容易给患者造成巨大的精神压力和财产损失。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种胃癌血清检测鉴定试剂盒及其应用，针对胃癌血清学检测中的非特异性问题，以及检测结果假阳性或者假阴性的问题，本发明提供的胃癌血清检测鉴定试剂盒，用于辅助胃癌血清学(如CA19-9、CA24-2、CEA)检测，可以有效去除假阳性和假阴性的检测结果，具有更高的灵敏度(图3)。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种胃癌血清检测鉴定试剂盒，所述试剂盒包括cel-miR-39-5p片段、引物、外泌体分离试剂、外泌体miRNA提取试剂、反转录试剂和实时荧光定量PCR试剂；所述引物为：cel-miR-39-5p内参引物、hsa-miR-375引物、hsa-miR-590-5p引物、hsa-miR-19b-3p引物、hsa-miR-100-5p引物和hsa-miR-16引物。

所述cel-miR-39-5p片段核苷酸序列为：AGCTGATTTCGTCTTGGTAATA，优选购自Qiagen公司miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control试剂Cat No./ID:219610；

引物如下：

cel-miR-39-5p内参引物：AGCTGATTTCGTCTTGGTAA，优选购自Qiagen公司的miRNeasy Serum/Plasma试剂盒(Cat No./ID:217184)；