[发明专利]一种人EIF4H多肽及其抗体制备方法

说明书

本发明公开了一种C端特异的人EIF4H多肽以及抗体的制备方法，属于以抗体为特征的体外实验用的生物制品。C端特异的人EIF4H多肽的氨基酸序列为：GARPREEVVQKEQE。抗人EIF4H多肽抗体按以下方法制备：(1)人EIF4H抗原表位分析；(2)人EIF4H C端多肽合成；(3)合成多肽与载体蛋白交联；(4)制备兔抗人EIF4H多肽抗体；(5)收集、分离得到含有抗体的血清，纯化抗体，即得到抗人EIF4H多肽抗体。本发明制备的C端特异的抗人EIF4H合成多肽抗体效价高、亲和力强、特异性好，可与天然人EIF4H发生特异性结合反应；制备成本低；纯化后的抗体可以用于免疫印迹。该抗体为EIF4H蛋白的基础研究(如对EIF4H的特性、功能、表达谐和含量的分析)及其相关疾病(如威廉斯综合症)的研究提供了一个重要的工具。

1.技术领域

本发明涉及一种多肽及其抗体制备方法，这种抗体主要用于天然蛋白抗原的检测。

2.背景技术

1)EIF4H功能：EIF4H是RNA结合蛋白RRM家族的一个成员，家族成员包括1-4个拷贝的RRM结构域。RRM结构域长度为80-100氨基酸，包括两个叫做RNP1和RNP2短的伸展的保守序列，和一些高度保守的疏水残基。EIF4H在N末端有一个RRM结构域，同时在序列中间有一个HHV-1Vhs结合位点(J Virol.2008Jul；82(13)：6600-9)。该蛋白有两种剪切形式，表达较为广泛，但是作为主要存在形式的短剪切形式只在肝脏和骨骼肌表达。有研究标明，该蛋白能够与EIF4B及EIF4F一起，与EIF4A形成复合物，具有解旋酶活性，在由mRNA合成蛋白质的过程中发挥了重要作用(J.Biol.Chem.276：30914-30922(2001))。

2)EIF4H抗体产品信息：经检索，市场上有Anti-EIF4H多克隆抗体产品，但是相关此抗体产品所用抗原多肽序列与我公司所用抗原多肽序列不同。

3)EIF4H抗体的应用：

EIF4H基因的单一等位基因不足性可能是威廉斯氏症患者心血管及肌肉骨骼异常的诱因。对于正常入和威廉斯氏症患者染色体7q11.23的序列分析结果比较表明，EIF4H基因位于该区域，且在威廉斯氏症患者中表现为单一等位基因。(Mamm Genome.2000Oct；11(10)：890-8)这就提示我们，对于该靶蛋白的功能研究将有助于了解其在威廉斯氏症的作用，对于该病的治疗将有积极作用。

3.发明内容

本发明提供了一种EIF4H多肽，其序列为：GARPREEVVQKEQE。用此多肽制备的抗EIF4H抗体可以在免疫印迹(Western blot)分析中特异识别组织或细胞中的天然EIF4H蛋白。

抗EIF4H抗体是通过以下步骤获得的：

步骤一：多肽序列的分析和设计：利用DNAstar软件对EIF4H蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估亲水性，抗原性，表面可能性，柔性区等指数，再结合过去制备抗体的实际经验，最终确定EIF4H蛋白235-248位14个氨基酸作为合成多肽氨基酸序列，序列为GARPREEVVQKEQE。

步骤二：多肽合成和交联：采用ACT396全自动多通道多肽合成仪合成目的多肽，并采用质谱进行鉴定；为增强多肽的抗原性，将EIF4H多肽与载体蛋白KLH采用Sulfo-SMCC交联法进行交联。

步骤三：多肽免疫和抗血清制备：将交联后的EIF4H-KLH与弗氏佐剂混合乳化，在新西兰兔背部进行皮内注射免疫，并反复加强免疫，至取血检测抗体效价达到标准时停止免疫。

步骤四：抗体纯化：实验兔抗体效价达到标准后，采用心脏取血，分离抗血清，采用Protein A纯化全抗体后，进一步采用肽亲和纯化，得到目标抗体。

抗EIF4H抗体是通过以下步骤鉴定的：