[发明专利]一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗的方法

说明书

本发明公开了一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗的方法，取驼峰藤幼嫩茎段及叶片作为外植体，消毒后接种到过渡培养基中，外植体在过渡培养基中培养一段时间，取未污染的叶片外植体转接到愈伤组织诱导培养基中诱导培养，诱导增殖，用增殖后的愈伤组织诱导不定芽；取未污染茎段外植体转接到不定芽诱导培养基中诱导培养，再转接于不定芽增殖培养基中诱导增殖，将分化出的不定芽接种于生根壮苗培养基中培养。对不同外源植物生长调节剂种类、浓度、搭配比例进行优化选择，确定对驼峰藤愈伤组织、不定芽诱导及其再分化成苗的影响，筛选出诱导驼峰藤培养基的配方，该组培无性快繁，能保持母株优良遗传性状。这对于驼峰藤资源保存和药物及园林开发利用有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，属于稀有特有植物的组织培养技术，尤其涉及驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗方法。

背景技术

驼峰藤（Merrillanthus hainanensis）是萝藦科驼峰藤属国家二级保护植物，中国特有物种，具有观赏和药用价值。驼峰藤为木质藤本植物，叶对生、膜质、羽状脉，叶柄顶端具丛生小腺体，聚伞状花序，腋生，着花多朵；花梗细，长0.5～1.5 cm，基部着生有卵形的小苞片；花蕾圆球状，花冠裂片的顶端向内粘合；花萼裂片、卵圆形，长2 mm，宽1.5 mm，具缘毛，花萼内有5个小腺体；花冠黄色，辐状或近辐状，有脉纹，5裂至中部，裂片广卵形、钝头，略向右覆盖；副花冠5裂，肉质，着生于合蕊冠上，裂片卵形，背部隆起，腹部贴生在雄蕊上；花药顶端的透明膜片近卵形，覆盖着柱头；花粉块长圆形，下垂，顶端通过花粉块柄与着粉腺连结；子房无毛，柱头平扁，基部盘状；蓇葖单生，纺锤状，长9～112 cm，直径3.5～14 cm，外果皮黄色，无毛；种子近圆形，顶端具白色种毛，种毛长3.5～4 cm；花期3～4月，果期5～6月。驼峰藤生长于低海拔至中海拔山地林谷中，主要分布于高要、保亭、万宁和白沙等地，由于过去大力采伐天然林，致使驼峰藤天然族群量极稀少。

经查阅相关文献表明驼峰藤为中国特有物种，国内对驼峰藤的研究甚少，仅在《中国植物志》、《海南植物志》和《广东植物志》上有简单的形态学描述，除此之外便查阅不到其它研究资料和相关记载，也未查阅到国外的相关研究文献。

经查阅相关文献，目前国内外还未见有关驼峰藤组织培养、扦插等方面的报道。物种资源的保存与开发利用研究，越来越成为全球植物学者重要的课题，而驼峰藤作为中国特有物种，保护其物种资源意义深远。本发明探索出了利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖驼峰藤无菌苗的培养基配方及培养方法，具有一定的独创性和新颖性。

发明内容

本发明的目的是建立了一套利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗方法，从而不再单纯的依靠种子繁殖、扦插繁殖等传统繁育方式进行栽培。利用组培技术繁殖出的种苗最大限度的保持了母本的特性，同时可在短期内获得大量性状一致、脱毒的驼峰藤无菌苗，为野生驼峰藤资源的保护、群落的恢复和利用驼峰藤进行退耕还林、植树造林等提供了一种新的技术支撑。

本发明可通过以下技术实现：

1）外植体培育

驼峰藤种子经浸泡催芽处理后，播种于以椰糠：沙子=1:1为基质的苗床，小苗长至5 cm左右后移栽到大田，并做好水肥和病虫害防治管理，待需要外植体材料时，用不锈钢剪刀剪取顶端新长出的茎段或叶片，作为外植体材料来源，外植体采集宜于在晴天的8:00~10:00进行。

2）无菌苗获取